分析型超速离心机样品池的组装、装载与校准

大家好，我是Andrea Balbo，我在美国国立卫生研究院Peter Shuck的研究组工作。在本视频中，我们将向您演示分析型超速离心机样品池的组装、上样以及转子对准的操作流程。

我们开始吧。已收集。以下是分析型超速离心机样品池的组件：在池体内部堆叠有一个12毫米双通道炭黑填充的环氧中心件，该中心件将被夹在两个窗组件之间。每个窗组件由一个窗垫圈、一个窗衬管以及固定在窗支架内的窗片组成。

然后通过将这些部件的键槽与外壳筒体内侧的凸键对齐，将其滑入细胞室内部，接着放置外壳垫圈，并用螺纹环以120至140英寸·磅的扭矩压力封闭样品池。在装入样品后，需使用两个外壳塞垫圈和一个外壳塞来密封样品池的装样孔，以避免在实验过程中产生扫描伪影、泄漏或破裂。所有组件必须保持清洁、干燥、无灰尘，并处于最佳状态，应经常检查并在必要时及时更换。您还需要以下设备：分析型超速离心机、钛制四孔转子、实验室天平、带可读刻度盘的扭矩扳手和扭矩支架、平衡管及平衡管配重、平头螺丝刀、镊子、配备长锥形吸头的200微升移液器、对准工具以及旋涂润滑剂。

我们通过组装两个窗片组件开始制备样品池。首先，将窗片垫圈放置在窗片支架的底部。接着，将窗片衬垫（有时也称为窗片缓冲垫）置于窗片支架内部，使衬垫的开口与支架的键槽呈轻微角度相对。

然后将窗口片放入窗口片支架中，使窗口片上的刻线标记与支架的键槽对齐。轻轻按压窗口片两侧的最边缘处。为了确保样品池的正确密封和精确调节，我们在螺纹环内的壳体垫圈上薄薄地涂上一层润滑剂。

使用旋涂润滑剂，取极少量旋涂剂置于拇指和食指之间。在螺纹环螺纹上涂抹一层薄至不可见的旋涂剂薄膜。同样方法涂抹外壳垫圈。

擦去任何可见的润滑剂。开始样品池组装。将一个窗口组件的窗口朝上朝向您，通过将键槽与池体上的键对齐，滑入池体中。

将中心部件的键槽与外壳的键对齐，并让其轻轻落在外壳内部的窗片组件上。切勿使用任何工具将中心部件推入细胞外壳中，否则可能导致中心部件永久损坏，从而在储存实验过程中发生泄漏。

将第二个窗体组件旋转，使窗口朝向中心部件并背向操作者。将键槽与外壳的键对齐，然后将其滑动至中心部件上方。将外壳垫圈放置在顶部。

然后安装一个螺纹环，使“out”字样可见。用手操作。接着使用对准工具，手动拧紧螺纹环。

有时中心部件无法顺利滑入外壳筒中。可先将其对齐，然后将第二个窗口组件放在其上方，再轻轻向下按压窗口组件。

可以同时将两者滑入细胞室中。通过这种方式，我们避免了直接按压中心部件。现在是检查细胞室是否有灰尘、绒毛和指纹的好时机。

您还会观察到牛顿环，这表明中心部件与窗口之间仍有空气。拧紧螺钉环后，牛顿环将消失，此时“word out”字样会变得可见。将样品池完全放入样品池座中。

扭矩支架的夹头。通过在扭矩支架手柄上施加恒定压力来固定细胞位置。以连续动作将螺钉环拧紧至120至140英寸磅之间。

松开扭矩支架手柄，小心取出样品池。我们通常在12毫米中心部件的每个扇区中加载400微升的样品体积。使用200微升移液器，将样品池放置成加样孔朝上，且螺纹环上的“out”字样可见。

通过加样孔将移液枪头插入左侧中心池区域一半深度，缓慢加入200微升参考溶液。使用同一枪头和相同技术，小心缓慢地重复一次，共计加入400微升。用400微升样品溶液填充右侧中心池区域。

必须尽可能使参比溶液和样品溶液的体积相匹配。将移液器吸头牢固地安装在移液器上，缓慢吸取和排液，避免吸入气泡，并对两种溶液使用同一吸头，这些操作均有助于保持体积一致，从而确保密封细胞。

将两个红色外壳塞密封圈紧密地放入每个加样孔中，确保它们被小心地放置在中心部件与铝制外壳之间。用外壳塞盖住每个加样孔，并用小型一字螺丝刀手动拧紧。在装载转子之前，确保平衡管与位于平衡管对面的样品管之间的重量相差不超过0.5克。

将天平归零。首先，称量一个将放置在对侧配重位置的样品池，然后去皮以扣除样品池的重量。

然后称量平衡块。此处我们发现平衡块比样品池轻4.193克。选择一个4克的平衡块配重，将其旋入平衡块的安装孔中，确保其不从顶部突出。

调整平衡物的重量，确保最终重量在0.5克以内。使用四孔转子时，将平衡物放入4号位置，使白色箭头可见并指向离心力方向。使用对准工具，确保平衡物完全插入转子内部。

将平衡样品池放置到位，使外壳塞朝向转子中心，且螺纹环上的“out”字样可见。再次使用对准工具，从转子底部观察，确保其已完全插入转子内部。

对齐内部。使用划线工具，在配重块上标记最靠近转子中心的刻度，并与之对齐。以相同方式，将样品池在2号位置进行对齐。

所有细胞排列整齐后，转子即可放入离心机腔室。