miRNA 提取：一种从血浆样本中提取 miRNA 的方法

— 微小RNA（miRNA）是一类参与基因调控的小分子非编码RNA。在癌症发生过程中，miRNA的表达水平会发生改变，因此具有作为癌症生物标志物的潜力。开始进行miRNA分离时，取新鲜采集的全血样本，在4摄氏度下离心，以分离血浆与血细胞。将上清液转移至新的离心管中，再次离心以获得更澄清的血浆上清液。吸取上清液后，加入预冷的匀浆液进行处理，随后加入裂解缓冲液以充分匀浆样本。加入蛋白酶K酶溶液以降解蛋白质，特别是那些在后续实验步骤中可能降解RNA的核酸酶。

— 接下来，将裂解液加入预组装的核酸提取仪专用 cartridge 的指定孔中。向相应孔中加入 DNase 1 溶液，以去除样品中的基因组 DNA。向 cartridge 上组装的洗脱管中加入无核酸酶水，用于 miRNA 分离前的预处理。将 cartridge 组件装入核酸提取仪中。选择并运行相应的 miRNA 纯化程序。完成后，取出含有 miRNA 的洗脱管，于 -80 摄氏度保存。

－ 在以下实验方案中，我们展示了从肺癌筛查患者的血液样本中提取miRNA的方法。

— 开始本实验方案时，使用真空采血管采集10毫升全血样本，并在室温下保存。

– 避免在低温（如 4 摄氏度）下储存全血，以防热休克和细胞裂解导致非特异性微小 RNA 释放。

－在采血后一小时内离心血浆以进行分离。转移上清液时需避免接触淋巴细胞环，将上清液转移至15毫升离心管中。然后在相同条件下再次离心上清液。分装1毫升该血浆上清液至1.5毫升冻存管中，注意避免吸取管底的血浆组分。开始RNA提取时，每个样本向200微升血浆中加入200微升预冷的OMG溶液。为确保充分均质化，涡旋振荡15至30秒。为均质化样本，每个样本加入200微升裂解缓冲液和25微升蛋白酶K，涡旋振荡20秒。

— 然后将样品置于37°C的恒温混匀仪中孵育15分钟。接着，选择RSC miRNA组织方法，并为每个样品在核酸自动提取仪的载样盘上装载一个提取柱，正确安装活塞。将裂解液转移至仪器提取柱的指定位置，并加入5 µL DNase 1溶液。在每个洗脱管底部加入60 µL无核酸酶水。启动运行程序，开始自动化纯化过程。将获得的总RNA样品储存于-80°C。