使用 Scepter 细胞计数器确定细胞培养过程中的细胞数量

赛特细胞计数仪是一种手持式自动化设备，用于细胞计数、监测细胞直径和体积，以及检测细胞群体的健康状况和质量。与其他计数方法相比，该仪器具有显著优势，包括更高的准确性、操作简便以及较低的细胞计数成本。使用赛特细胞计数仪时，请按照其图形显示屏上的指示，将细胞吸入一次性传感器中。

随后对细胞进行计数，该设备会报告细胞浓度和统计结果，这些数据可上传至计算机并进行分析。大家好，我是Sonya。我是Millport的一名科研人员，今天我将向您展示如何使用Scepter。

细胞计数是体外细胞培养中必要但繁琐的步骤。稳定的细胞浓度可确保实验的可重复性和准确性。细胞计数对于监测细胞健康状况和增殖速率、评估永生化或转化细胞的传代接种、转染或感染，以及为基于细胞的检测实验做准备至关重要，即使在需要快速和准确的情况下也是如此。

在细胞计数中，接受调查的400名研究人员中有71%使用血细胞计数板进行细胞计数。尽管血细胞计数法成本低廉，但该方法费时费力，且容易受到操作者偏差和误用的影响，从而导致计数结果不准确。血细胞计数法的误差来源包括样本中细胞分布不均、样本中细胞过多或过少。

关于特定细胞是否位于规定计数区域内的主观判断。血细胞计数板污染、操作者间差异以及血细胞计数板加样速率的变异，均可减轻手动计数带来的繁琐性。29%的研究人员使用自动细胞计数设备进行细胞计数。

然而，对于大多数研究人员而言，这些大型台式仪器的价格是限制其使用的主要障碍。Scepter 细胞计数器是一种自动化的手持式设备，以相对较低的成本和便于使用的手持式设计，提供了与库尔特（Coter）计数相当的自动化水平和准确性。该系统采用基于阻抗的颗粒检测库尔特原理，以微型化形式实现，并结合模拟与数字硬件，用于传感、信号处理、数据存储和图形显示。

一次性传感器采用微加工的细胞感应区设计，能够以亚微米和亚皮升级别的分辨率区分细胞大小和细胞体积，并结合精密的液体处理通道和电子元件加以增强。Scepter细胞计数器以直方图形式直观显示细胞群体统计结果供使用。Scepter细胞计数器操作首先将单细胞悬液用磷酸盐缓冲液进行稀释。

每毫升 10,000 至 500,000 个细胞的浓度为最佳。将 100 微升稀释后的细胞转移至 1.5 毫升的微孔管中。通过按住仪器背面的开关并保持，开启 Scepter 细胞计数器，然后等待屏幕上的操作提示出现。

当提示时，将传感器连接到手柄单元的末端，使电极感应面朝向仪器前方。Scepter 传感器由精密模制的采样室组成，内含电子感应区和集成的细胞感应电极。这些传感器能够以亚微米级分辨率区分细胞大小，并以亚皮升级分辨率测定细胞体积。

一致的传感器设计可确保对等量的样品体积进行计数，并实现精确的尺寸测量。传感器连接后，请按照屏幕上的以下指示逐步完成计数过程：当屏幕显示“按住柱塞”时，按住柱塞开始下压，屏幕将随后显示“浸入传感器”，此时将传感器浸入细胞悬液中，然后松开柱塞，以将细胞悬液吸入传感器内。

活塞起到电信号的作用，会将样品及死体积吸入传感器中。与移液操作不同，活塞推进的速度或准确性并不重要。此过程准备好后将持续数秒。

仪器会发出蜂鸣声，屏幕上将显示已加载的样本。样本加载到传感器后，会被吸入检测区域以测定细胞大小和细胞体积。随后样本流经微通道，当计数达到50 µL时，传感器会通知仪器停止计数。

计数完成后，仪器屏幕将显示“计数完成”。请取下传感器并丢弃。根据提示，取下并丢弃传感器。

仪器随后将在屏幕上显示细胞大小或直径的直方图，以及每毫升的细胞浓度。计数完成后，当直方图显示在仪器上时，按下切换按钮以设置门控，选择自动设门或使用上一次的门控，以根据直方图轮廓自动设定门控，或沿用上一次计数的门控设置。无论选择何种方式，均可手动调整门控位置以进行微调。

调节数据，再次按下切换按钮以选择左侧门控，滚动切换按钮将门控移动至所需位置。然后再次按下切换按钮以激活右侧门控，并滚动切换按钮放置右侧门控。再次单击。

将显示新的细胞浓度、平均细胞体积和直径。该切换开关还可用于在日期时间、平均细胞大小和平均细胞体积之间进行切换，仪器本身最多可存储 72 个直方图。要将数据上传至个人计算机，请通过 USB 电缆端口将仪器连接到计算机的显示屏幕。

双击 scepter 软件应用程序以启动软件，然后单击连接。所有计数将自动传输到软件中。

“scepter” 应用软件会显示直方图，详细说明培养物在体积或直径上的群体分布情况。下载的文件可导出至 Microsoft Excel，原始数据将以指定的细胞直径或细胞体积区间进行显示。共准备了 19 种不同的细胞系用于计数，并使用 Aculter 计数器确定理论起始浓度。

随后将这些细胞悬液进一步稀释，以获得理论细胞浓度的细胞悬液。然后使用Scepter细胞计数仪测定细胞浓度。该图显示了五种代表性细胞系的五次稀释测定结果，以及相应的理论细胞浓度。

如 r 平方值所示，高度的线性关系表明，在较宽的线性工作范围内，Scepter 计数法对于所测试的细胞系是一种可靠的方法。此处展示了 Scepter 计数的整体相对准确性，即将 Scepter 计数获得的数据与 Coter 计数获得的结果进行比较。Scepter 细胞计数的对数值与 Coter 计数的对数值作图显示，在所有测试的细胞系中，Scepter 计数与 Coter 计数结果一致。

使用Z two库尔特计数器对19种细胞系进行了计数。Scepter细胞计数器是一种基于自动成像的计数器，例如V细胞或count test系统，以及血细胞计数均按照制造商的说明，采用相同的起始细胞悬液和相同的稀释倍数进行。本图所示结果表明，通过Scepter计数测得的细胞浓度与理论细胞浓度高度一致，且具有良好的线性关系。

针对每种细胞系的每种稀释度，计算其变异系数百分比（CV）。对于此处所示的每种计数系统，数据表示在仪器工作范围内，19 种细胞系在不同细胞浓度和计数方法下的平均 CV 百分比。Scepter 细胞计数仪比血细胞计数板计数法更精确，其标准差更小，平均变异系数也更小。

Scepter细胞计数比血细胞计数法快10倍，也比其他自动计数器更快。本实验使用本视频中所述方法对SF nine、MCF seven和HC 2 93细胞进行了计数，并记录了测定细胞浓度所需的平均时间。

请注意，每个样本仅进行一次血细胞计数。Scepter 根据细胞大小进行测量，因此细胞形态的任何变化均可在直方图中体现。

健康的细胞群呈现出良好的钟形高斯分布，而状态不佳的细胞则会出现死亡并导致直方图向左偏移。类似地，当将50%的死细胞与50%的活细胞混合时，也可观察到直方图的偏移。我刚刚向您展示了如何使用默克密理博（Millipore）推出的新型Scepter细胞计数器，该仪器正在彻底改变研究人员进行细胞计数的方式。