利用可变数目串联重复序列(VNTR)分析检测鱼类病原体

0 次观看3:01 分钟 • November 28th, 2025

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从含有甲酰胺变性溶液的 PCR 板开始。

将来自鱼类致病菌的稀释后PCR扩增产物加入每个孔中。

这些扩增子包含带有荧光标记的可变数目串联重复序列(VNTRs),即作为细菌鉴定遗传标记的短重复序列。

密封培养板并离心以去除气泡。

在热循环仪中加热反应板,使双链 VNTR 变性。

甲酰胺可增强链分离并抑制复性。

迅速冷却平板以稳定单链 DNA。

离心以收集样品体积。

移除封条,并用框架固定板。

放置毛细管并进行毛细管电泳。

在电泳过程中,VNTR 片段在电场作用下通过毛细管迁移,并按大小分离。

激光激发每个片段上的荧光标签,产生颜色编码的信号。

所得的电泳图谱显示了与致病菌相对应的VNTR峰型模式。

在确认PCR扩增子后,使用新的PCR条管或板将PCR产物用纯化水按1至10的比例稀释。充分涡旋混匀并短暂离心。在通风橱内操作时,于离心管中配制含有甲酰胺和参考大小标准溶液的混合液。

根据待分析的PCR产物数量,使用文中所述的试剂体积,并额外增加10%的余量。短暂涡旋混匀,然后将9.5 µL分别加入适用于现有毛细管电泳系统的PCR板的各个孔中。

然后,加入0.5 µL稀释后的PCR产物。密封并短暂离心。随后,将含有样品的反应板放入PCR扩增仪中,在95 °C下变性3分钟,然后无限期冷却至4 °C。

在1000 g 条件下离心1分钟,小心移除密封膜,然后根据制造商说明书将样品板加载到校准的毛细管电泳系统中。运行片段分析毛细管电泳,根据所选仪器选择适当的试剂,并按照论文中的描述调整运行条件。

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最后更新:22 八月 2026