生物层干涉技术检测配体与分析物之间的相互作用

使用生物层干涉技术（BLI）检测配体-分析物相互作用时，首先将水合的光纤生物传感器固定在BLI仪器的支架上，并设置为所需的程序。

生物传感器尖端涂覆有一层固定化镍-次氮基三乙酸（Ni-NTA）基团的生物相容性材料。将生物传感器尖端浸入缓冲液中。

该仪器向生物传感器发射白光，光束从两个界面反射：内部参考层（光学层）和生物相容层。反射光束在不同波长下发生相长或相消干涉。光电探测器检测由此产生的干涉图样。

在完成基线干涉响应测量后，加入带有组氨酸标签的配体溶液。组氨酸标签会与生物传感器上的镍阳离子结合，从而使配体固定在探针末端。

结合后，发射的白光从光学层反射，而固定有配体的生物相容层在尖端处因光学厚度增加，进一步增强了反射层间的距离，导致干涉图样发生偏移，并引起波长变化。

清洗探针尖端，去除未结合的配体。加入目标分析物溶液孵育。分析物与配体结合，进一步增加探针尖端的光学厚度，导致波长偏移增大。

将生物传感器探针置于缓冲液中。记录分析物从固定在探针上的配体解离过程中波长的变化。

通过监测波长随时间的偏移变化，可促进对配体与分析物之间分子相互作用的研究。

打开BLItz仪器。确保该仪器通过仪器背面的USB数据输出端口与计算机连接。

在计算机上打开相关软件，然后点击屏幕左侧的“高级动力学”。在软件中，根据每个相应的标题输入实验的所有适当信息。点击“生物传感器类型”，然后从下拉菜单中选择“Ni-NTA”。每个步骤的持续时间可根据需要从默认值进行修改。为获得最佳结果，初始基线和基线建议至少设置为30秒，结合和解离建议设置为120秒。

从 PCR 管中取出水合的镍-NTA-生物传感器，并通过将生物传感器的宽端滑入仪器上的生物传感器支架中，将其固定在机器的生物传感器支架上。

将一个0.5毫升的黑色微量离心管放入仪器的管架中，并用移液器向其中加入400微升BLI缓冲液。关闭仪器盖子，使生物传感器探头浸入微量离心管中的缓冲液中。在软件中点击“下一步”，开始记录初始基线。

完成初始基线步骤的记录后，打开仪器盖子，将滑块移至右侧。用移液器吸取 4 µL 透析过的 His 标签配体，加入液滴支架中，然后关闭仪器盖子，仪器将自动开始记录加载步骤。

完成上样步骤的记录后，打开仪器盖子。将滑块向左移动，使试管架再次位于黑色箭头前方。关闭仪器盖，确保生物传感器尖端浸入试管架中试管内的BLI缓冲液内。仪器和软件将自动开始记录基线步骤。

完成基线步骤的记录后，打开仪器的盖子。取下液滴架，用移液器吸除其中的蛋白质溶液，并用双蒸水冲洗五次。最后一次冲洗后，用擦镜纸擦拭液滴架表面。将液滴架重新放回仪器上。将仪器上的滑块向右移动，使液滴架再次位于黑色箭头前方。

用移液器将4 µL透析后的分析物滴加到液滴支架上，然后关闭仪器盖子，仪器将自动开始记录结合阶段。结合阶段记录完成后，打开仪器盖子。将仪器上的滑块向右移动，使管架再次位于黑色箭头前方，然后关闭仪器盖子，仪器将自动开始记录解离阶段。