小鼠脑组织的下游分析处理

取新鲜收获的小鼠脑组织，将其在预冷的异戊烷中速冻，以实现快速组织保存。

接下来，将脑组织（皮层朝上）转移至冷冻脑切片矩阵中，以在切片过程中保持低温环境。

让脑组织与基质温度达到平衡。将其沿矢状窦和横窦方向在基质中对齐，以确保切出对称的切片。

将预冷的刀片插入脑组织，确保位置正确对齐。

然后，均匀按压以获得厚度一致的脑切片。

取下带有切片的刀片，并将其头侧朝上放置在冷冻的玻璃板上。

按照从头端到尾端的方向，将各部分按正确的解剖学顺序排列。现在，将它们分开。

使用合适的大脑参考图谱，从切片中定位并切除目标区域。

将切除的组织转移至预冷的离心管中，用于后续分析。

从安乐死后的成年CD-1野生型小鼠中取出脑组织后，将其在液氮或经干冰预冷的异戊烷中快速冷冻60秒，并于-80摄氏度保存。

在解剖组织前24小时，将一个干净的脑切片模具放置在一堆已解冻的冷冻包上，并用两个冷冻包夹住模具两侧，确保刀片槽底部与冷冻包顶部之间留出约半厘米的距离。

通过在隔热箱中装入冰块至距顶部约5厘米处，为解剖准备一块冷冻的玻璃板。然后，在冰上放置一层约2.5厘米厚的干冰，并用黑色塑料布覆盖。将玻璃板置于塑料布上，并在玻璃板四周放置干冰。

从冰箱中取出冷冻的脑组织切片模具，将脑皮层朝上放入模具中。打开盖子，让组织在盒内平衡温度10分钟。使用预冷的镊子调整脑组织在模具中的位置，使矢状窦和横窦与模块中的垂直凹槽对齐。

将脑组织放置到位后，在其中心附近放置一片预冷的剃须刀片，并将其轻轻压入组织约1毫米。接着，在脑组织的两端各放置一片预冷的刀片，并将其完全压入基质中。然后，从脑组织的吻端开始，依次将预冷的刀片插入槽中，每次插入一片，并轻轻将其压入组织1毫米。以1毫米的间隔继续添加刀片，逐步向尾端推进。

当所有刀片就位后，用手指、手掌或钝物按压顶部，并缓慢左右摇动，使刀片穿过组织。当刀片到达槽底部后，握住刀片组两侧，通过前后摇动将其从基质中取出。

松开刀片组后，将其吻侧朝上放置在玻璃板上，并将干冰置于刀片堆叠的旁边或上方，以进一步冷冻样品，便于分离。然后，将刀片堆叠锋利边缘朝下放置，通过拇指与手指来回移动堆叠来分离刀片。

将切片按从头端到尾端的方向排列在玻璃板上，并通过手指弯曲刀片或将组织用另一把预冷的刀片分离，使组织与刀片分开。有时组织可能会同时粘附在刀片的两侧，此时必须小心操作，以保持从头端到尾端的方向性。

开始解剖前，打开Allen 小鼠脑图谱或其他参考图谱，找到用于识别目标区域的解剖标志。使用预冷的镊子或刀片翻转切片，并确保目标区域在整个切片中保持一致。

使用洁净的手术刀或打孔器进行切割，将金属工具轻轻但有力地推入组织，前后摇动以完成切割。取材感兴趣的区域后，将其放入已标记的预冷1.5毫升离心管中，并于-80摄氏度保存。