小鼠脑组织切片中多巴胺能神经元的免疫组织化学染色

0 次观看2:42 分钟 • April 29th, 2025

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取一张带有小鼠脑组织切片的聚合物涂层载玻片,切片中含有表达酪氨酸羟化酶(多巴胺合成关键酶)的多巴胺能神经元。
使用疏水笔标记切片区域,以确保染色均匀。
用丙酮-甲醇溶液固定组织,以保持组织形态。
用含去污剂的缓冲液冲洗,以通透细胞膜。
加入靶向多巴胺能神经元中酪氨酸羟化酶的一抗进行孵育,随后洗涤以去除未结合的一抗。
加入荧光染料标记的二抗、核染料和RNase抑制剂。
孵育过程中,二抗与一抗结合,核染料标记细胞核,RNase抑制剂则使RNase失活。
用缓冲液冲洗,然后将组织切片依次浸入浓度递增的乙醇中进行脱水。
在二甲苯中孵育以透明化组织。
处理后的组织切片现已准备好进行激光显微切割,可实现对目标多巴胺能神经元的精确定位与分离。

进行免疫组织化学实验时,使用疏水性笔标记组织轮廓,并使其干燥。随后,在体积比为1:1的丙酮-甲醇溶液中,于-20摄氏度条件下固定组织10分钟。从冷冻环境中取出组织后,每张切片上加入100至200微升含1%吐温的PBS缓冲液配制的酪氨酸羟化酶抗体溶液,覆盖切片并孵育10分钟。

然后,使用含1% Triton的PBS冲洗切片,再在切片上覆盖100至200 µL Alexa Fluor 488标记的山羊抗兔IgG。孵育5分钟,随后用PBS冲洗切片两次。接着,将样本依次浸入无RNase的梯度乙醇中脱水,每次30秒,操作方式如本视频前面所示。随后在二甲苯中孵育1分钟,进行第二次洗涤,持续5分钟。在进行激光显微切割(LCM)前立即取出切片,并使其自然晾干。

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最后更新:22 八月 2026