优化的骨骼取样方案用于从考古遗存中提取古DNA

这些方案可作为生成骨粉的最佳实践指南，适用于多种骨骼部位后续的DNA提取。目前已有少量已发表的古DNA取样方案涉及牙本质和岩骨以外的部位。今天，我们将展示三种替代部位的详细取样方法。

这些方法在处理降解的法医遗骸方面也展现出巨大的应用潜力，同时可作为开发非人类样本类似技术的基准。所有取样操作均应在专用的洁净室中进行，并在配备紫外灯的PCR工作台或生物安全柜内完成。关闭气流，将无菌铝箔铺在工作台表面，以收集任何散落的骨粉或碎片。

将一张称量纸放入无菌称量盘中。使用手持夹具夹住经去污处理的磨牙，使其釉质部分朝上，牙根朝下，置于称量盘上方。为牙科钻配备带有金刚石刃口的圆形切割轮。

将钻头调至中等转速，以约20度的角度轻轻接触根部边缘。向下刮取样本至托盘中，收集根部最外层的黄色物质。当牙本质的浅色组织开始显露时，停止采集。

将粉末转移至一个2毫升的LoBind Safe-Lock管中，并使用精度至少为0.01毫克的电子天平记录所收集的粉末质量。将粉末从称量纸转移至2毫升的LoBind Safe-Lock管中用于提取。将该管储存于20摄氏度条件下。

务必回收所有骨碎片及尽可能多的骨粉。每次取样后更换铝箔，并将使用过的铝箔丢弃至可高压灭菌的生物危害袋中。在处理下一块骨骼前，每次均需对工作区域进行去污染，并在实验台表面铺上新的无菌铝箔。

将一小张称量纸放入标准称量盘中。使用牙科钻头去除上位椎弓皮质骨最外层，并弃去。然后，用手持钳夹紧椎骨，使棘突朝外，上表面朝下固定。

固定椎骨后，以低速高扭矩向棘突与椎板融合形成的V形切迹中心向上钻孔。当阻力明显下降时，停止钻孔。轻微改变钻孔位置，重复操作，直至收集到50至100毫克的骨粉。

将称量纸上的骨粉转移至一个2毫升的LoBind管中用于提取，并在20摄氏度下保存。在丢弃铝箔前，确保回收所有骨碎片及尽可能多的粉末。对工作区域进行去污染处理，并按照之前所述方法准备样品采集。

将一小张称量纸放入标准称量盘中。手持距骨，使其穹窿朝上，内侧面朝向操作者，置于称量盘上方。使用牙科钻机，配以低速高扭矩的细钻头，从距骨颈部刮取皮质骨，深度约为一毫米。

更换钻取位置并重复此操作，直至收集到约50至100毫克的骨粉。将骨粉从称量纸转移至2毫升LoBind管中用于提取。将粉末长期保存于20摄氏度。

将剩余的骨骼和多余的粉末储存在干燥、温度受控的无菌环境中，温度为 25 摄氏度。所有废弃物应丢弃至高压灭菌生物危害袋或容器中。所有可重复使用的设备须进行灭菌或去污处理，并在每次取样之间暴露于紫外线下。

岩部骨产生的内源性DNA含量高于其他23个解剖学取样位点。本方案中列出的另外七个解剖学取样位点产生了次高的DNA得率。这些替代位点 consistently 产生的DNA得率均足以满足标准群体遗传学分析的需求。

来自所有解剖采样部位的文库重复率较低，表明文库复杂度高。牙齿和胸椎均显示出足够的分子回收率。骨样本采集最具挑战性的环节之一是钻孔过程，例如如何握持钻头、在何处钻孔以及何时停止钻孔。