La sonda de microfluidos: Operación y Uso de tratamiento de superficies localizadas

Este procedimiento muestra cómo montar y utilizar la sonda microfluídica o MFP. Los componentes microfluídicos de la MFP son jeringas herméticas al gas, tubos capilares de vidrio, conectores micro herméticos de Upchurch y la cabeza de la MFP. Este video presentará los pasos críticos de montaje y alineación.

Una vez ensamblado, el MFP puede utilizarse con una gran variedad de sustratos y reactivos para el grabado y procesamiento de superficies. Hola, soy Cecil Perot. Soy investigador postdoctoral en el laboratorio de David Yaker, del Departamento de Ingeniería Biomédica de la Universidad McGill en Montreal, Canadá.

Hola, soy Mohammad Kasime. Soy candidato al doctorado en el laboratorio de David Y del departamento de ingeniería biomédica de la Universidad McGill. Hola, soy David Yoker.

Soy profesor asistente en el Departamento de Ingeniería Biomédica, y me gustaría darles la bienvenida hoy a nuestra demostración sobre la sonda microfluídica. Hoy les mostraremos un procedimiento sobre el funcionamiento y uso de la sonda microfluídica. Utilizamos este procedimiento en nuestro laboratorio para el procesamiento y patrones de superficies.

Así que comencemos. Para iniciar este protocolo, se utilizan jeringas y agujas de plástico para llenar jeringas de vidrio de tipo gas con reactivos, asegurándose de que no haya burbujas de aire presentes. Típicamente, usamos una jeringa de uno a 10 microlitros para la inyección y una jeringa con un volumen de cinco a 10 veces mayor para la aspiración.

A continuación, utilizando conexiones herméticas de nano tamaño con bajo volumen muerto, las jeringas se conectan a tubos capilares. Los capilares se llenan luego y se revisan bajo el microscopio en busca de burbujas. El chip MFP se llena previamente con solución tampón para evitar el atrapamiento de burbujas al conectar los capilares.

Finalmente, los capilares se conectan a la pieza de conexión de PDMS en la cabeza de propulsión microfabricada. Con el MFP ya ensamblado, estamos listos para comenzar su configuración. El sustrato se inserta en un soporte casero.

Está fijado al portaobjetos del microscopio. La separación entre la punta de microfluídica (MFP) y el sustrato es crítica para los procesos de patrones superficiales. Mediante un soporte de tres puntos formado por tornillos micrométricos, el alineamiento horizontal se ajusta con precisión micrométrica.

Esto es necesario porque el sustrato se procesa escaneándolo debajo del MFP. Para comenzar a configurar el MFP, la cabeza de la sonda se sujeta en el soporte de la sonda y se monta en la estación de sonda encima de un microscopio invertido. Luego, las jeringas se colocan en bombas de jeringa de alta precisión.

A continuación, utilizando un par de goniómetros, se ajusta la alineación de la meza del MFP con el sustrato observando los anillos de Newton, también conocidos como franjas de interferencia. Estos aparecen cuando el MFP entra en contacto con el sustrato; el punto de contacto y la frecuencia de los anillos sirven como indicación de la inclinación. Cuando el MFP está alineado con la superficie, un único anillo de interferencia se extiende sobre toda la superficie.

Esta medida también sirve para calibrar la separación entre la MFP y el sustrato. Con la MFP configurada, ahora estamos listos para pasar a la operación de la MFP. Durante la operación, la dispensación se controla mediante el software LabVIEW.

El funcionamiento del dispositivo se visualiza a simple vista y con una cámara CCD. Antes de comenzar la aspiración adecuada, inyecte algo de líquido para asegurarse de que la jeringa de aspiración esté orientada correctamente y de que no haya burbujas. A continuación, se sumerge la MFP en el tampón.

Ahora podemos comenzar la inyección del líquido mientras se monitorea el confinamiento del flujo de las perlas. La relación de inyección y aspiración varía de uno a tres hasta uno a 10, dependiendo de la difusividad del reactivo con un tampón circundante y del patrón de flujo geométrico deseado. Finalmente, la sonda ya puede utilizarse para una variedad de aplicaciones.

Los patrones superficiales mostrados aquí se lograron mediante la MFP con biotina marcada con fluoresceína sobre portaobjetos de vidrio con hidrogel recubiertos de strep divide y ENC. La velocidad de flujo de inyección fue de un nanolitro por segundo, y la velocidad de flujo de aspiración fue de 10 nanolitros por segundo, utilizando jeringas de 10 y 50 microlitros, respectivamente. La separación entre la superficie y la sonda fue de cinco micrómetros.

El MFP también puede utilizarse para la tinción y el procesamiento local de células y tejidos. El confinamiento del flujo prohíbe la difusión del reactivo y permite una tinción química precisa de las células. Como se muestra aquí, una monocapa de células de fibroblastos fue teñida con 100 microgramos por mililitro de dai.

Así que les hemos mostrado cómo operar la sonda microfluídica. Al realizar este procedimiento, debe asegurarse de evitar cualquier burbuja en el sistema y de que la superficie de la sonda microfluídica esté paralela al sustrato. Eso es todo.

Gracias por ver el video y buena suerte con sus experimentos.