La transmisión de los virus de plantas usando moscas blancas

El objetivo general del siguiente experimento consiste en transmitir virus vegetales utilizando moscas blancas. Esto se logra estableciendo y manteniendo una colonia de moscas blancas que proporciona semanalmente moscas adultas recién emergidas, libres de contaminación por otros vectores y patógenos potenciales. Las colonias se mantienen agregando regularmente moscas blancas a plantas jóvenes libres de insectos, a partir de las cuales se producen nuevos adultos.

Después de 17 a 20 días cada semana, los adultos recién emergidos pueden transferirse a plantas de prueba para adquirir o transmitir el virus. Típicamente se obtienen eficiencias de casi 100 %, y las tasas de transmisión generalmente comenzarán bajas y aumentarán con una optimización sistemática. El aspecto más difícil de utilizar moscas blancas para inocular virus es criarlas de manera que se excluyan patógenos e insectos no deseados.

Los patógenos, especialmente los hongos que causan pudrición de raíces y las manchas foliares, reducirán la calidad de las plantas hospederas del virus. Insectos no deseados, como los trips, pueden suprimir la reproducción de mosca blanca así como comprometer la calidad de la planta hospedera del virus. Las procedimientos serán demostrados por Heather Capa Bianco, una técnica de mi laboratorio.

Las colonias de mosca blanca deben mantenerse en un cuarto de crecimiento limpio y controlado. El control de la humedad relativa, la temperatura, el período fotoperiódico y la intensidad luminosa son esenciales para una colonia que se desarrolla desde el huevo hasta el adulto en 18 días; utilice la siguiente configuración. La temperatura debe establecerse entre 26 y 30 grados Celsius, y la humedad relativa debería estar idealmente entre el 30 y el 50 %. Si la humedad relativa supera el 70 %, es probable que los patógenos fúngicos de los insectos y las plantas se conviertan en un problema.

El período de luz ideal es de 14 horas. La intensidad lumínica debe ser bastante alta, y las bombillas fluorescentes VHO pueden producir de 800 a 1000 pies-candelas en el dosel de la planta. Las dosis de fertilizante y el riego también deben reducirse para desalentar la presencia de patógenos fúngicos, así como la acumulación de sales. Las jaulas para mosquitas blancas deben permitir la ventilación, un fácil acceso y un espacio suficiente para una población creciente de mosquitas blancas.

Se han obtenido buenos resultados con organza orgánica más malla de aluminio, así como con malla blanca resistente. La identificación de la especie de planta es una consideración importante. En primer lugar, debe crecer rápidamente, sin embargo no debe sobrepasar la cámara. En segundo lugar, la planta debe ser lo suficientemente resistente como para sostener una alta población de insectos sin colapsar.

Por estas razones, los cultivares enanos o arbustivos son buenas opciones de plantas. En tercer lugar, la planta debe ser capaz de albergar o incapaz de albergar el virus que se esté utilizando, dependiendo del tipo de colonia que se esté criando. Debido a que la colonia puede colapsar debido a ácaros, THPs, moscas blancas silvestres u otros insectos invasores, los cultivares elegidos deben cultivarse en un ambiente protegido para excluir a otros insectos.

Las primeras moscas blancas de una nueva colonia deben estar libres de virus vegetales, otros insectos y patógenos de insectos. Si se recolectan moscas blancas del campo, críelas durante al menos ocho semanas en plantas que no sean hospederas del virus durante este periodo, y verifique la ausencia de síntomas en las plantas. Una vez obtenidas moscas blancas limpias, introduzca entre 20 y 100 en una jaula con plantas mediante aspiración o sacudiéndolas suavemente desde otra planta fuente.

Cada semana es necesario establecer una nueva jaula. Durante las primeras tres semanas, utilice moscas blancas de plantas no ST para establecer la nueva jaula. A partir de la cuarta semana, use moscas blancas adultas jóvenes de la jaula de tres semanas de antigüedad para establecer la siguiente jaula.

Durante la primera semana en una jaula, las moscas blancas pondrán huevos en la cara inferior de las superficies foliares de la planta. En la segunda semana, serán evidentes las formas inmaduras de mosca blanca y algunos adultos aún estarán vivos. En la tercera semana, habrán emergido muchas nuevas moscas blancas adultas, y debería observarse un aumento muy notable en la población de moscas blancas adultas.

Estos mosquitos blancos pueden utilizarse para experimentos de transmisión. En la cuarta semana, los adultos de una semana de edad deben transferirse a una nueva jaula. La jaula antigua debe retirarse y sus plantas descartarse. Preciso.

La transferencia suave de moscas blancas se realiza con un dispositivo de aspiración y viales de recolección; nunca aspire directamente. Las moscas blancas que se alimentan de plantas tienen sus estiletes insertados en la planta y se romperán si se separan bruscamente de ella, lo que hará que la mosca blanca sea inútil para su recolección. Para recolectar moscas blancas, sostenga un vial en una mano y, con la otra mano, mantenga una placa plástica amarilla dentro de la jaula de la colonia.

Toque suavemente las plantas para estimular a las moscas blancas adultas a volar. Las moscas blancas serán atraídas hacia la tarjeta amarilla, donde pueden ser recolectadas. Utilizando el aspirador y una succión muy suave, agregue no más de 20 moscas blancas a cada vial de recolección.

Luego, golpee el vial para desorientar a las moscas y tape el vial con parafina. Para asegurar una transmisión viral exitosa, pruebe con 15 a 40 adultos jóvenes de plantas infectadas con el virus en plantas sanas, dependiendo del virus y de la planta hospedadora. Otros protocolos, como la selección de resistencia, requieren poblaciones iniciales más grandes.

En este caso, agite las plantas infectadas con el virus, que están infestadas con moscas blancas, sobre las plantas que deben ser inoculadas. Una vez que las moscas blancas se colocan sobre una planta infectada con el virus, déjelas alimentarse durante 48 a 72 horas para adquirir virus transmitidos de forma persistente. Un tiempo mayor generalmente no aumenta la tasa de transmisión para virus transmitidos de manera no persistente o persistentemente hábil.

Un período de acceso de adquisición más corto, de una hora a un día, será suficiente para experimentos que requieran la adquisición de hojas específicas. Se pueden utilizar jaulas con pinzas; coloque la jaula de manera que la cara inferior de la hoja quede accesible, y no utilice más de 10 hembras de mosca blanca por jaula de 2,5 centímetros de diámetro, ya que la tasa de transmisión disminuirá debido al hacinamiento. Para la inoculación de plantas, seleccione la jaula adecuada considerando el número de plantas.

Una planta, por ejemplo, necesita solo una jaula pequeña, ligeramente más grande que ella misma; para múltiples plantas, elija entre una jaula de tubo de PVC más pequeña, una jaula con armazón o una jaula más grande con marco de aluminio. Cuanto más pequeño sea el espacio alrededor del dosel de la planta, mejor. Una vez que se agregan las moscas blancas a la planta nueva, el tiempo necesario para la inoculación depende del virus y de la planta hospedadora.

Al igual que en la adquisición, la cantidad de tiempo requerida para la transmisión depende del modo de transmisión. La transmisión no persistente requiere un tiempo de acceso mucho más corto que la transmisión semipersistente o persistente. Verifique que las moscas blancas estén sondando o alimentándose durante el período de acceso de inoculación.

Abrir la jaula e inspeccionar la parte inferior de algunas hojas en cada planta. Para los períodos más largos de inoculación, agitar suavemente las plantas periódicamente para favorecer la redistribución de los organismos sobre las plantas.

Esto aumentará la tasa de transmisión al contrarrestar la tendencia natural de las moscas blancas a agruparse, finalizando así el período de inoculación. Elimine las moscas blancas con dos insecticidas aplicados uno después del otro. Primero, aplique un insecticida de contacto para terminar rápidamente con las moscas blancas adultas, como el jabón insecticida.

En segundo lugar, aplique un insecticida sistémico para eliminar cualquier mosca blanca que se desarrolle en las semanas siguientes. Cualquiera de los compuestos restantes, arid o pyrazine, son opciones efectivas. Mediante estos procedimientos, es posible obtener rutinariamente tasas de transmisión viral del 100 %. Dichas tasas elevadas de transmisión son esenciales al evaluar plantas de prueba para resistencia viral y resultan deseables al analizar la eficacia de compuestos químicos respecto a su capacidad para interferir con la transmisión del virus.

Después de ver este video, debería tener una buena comprensión de cómo criar moscas blancas y utilizarlas para transmitir virus vegetales. Estos procedimientos pueden emplearse con fines de investigación o para el desarrollo comercial de plantas resistentes a virus, o bien para probar compuestos por su capacidad de interferir con la transmisión del virus.