תא כותרת Encapsulation על ידי טיפות

שמי הוא Hang Moon. אני עובד עם הפרופסור למניעות. הוא ואני עובדים עם במת XYJ כדי ליצור מבנה תלת-ממדי של תא.

שלום, אני PE ולין ואני עובדת על פרויקט הדפסת תאים הכולל כליאה של תאים, מצעי גידול וג'לים. זהו שסתום סולנואיד להזרקת תא ותערובת תאים של aros על מצע גידול לתאים. השסתום מופעל על ידי שני קווי איתות.

קו האות מגיע מלוח יבש כאן. האות מגיע מכאן. הקו הזה עובר דרכו, זהו מחולל הפונקציות הראשון.

ראשית, התהליך נוצר בדרך התכנותית שלנו. לכן, אם ברצונכם לשנות את הפעימה, תוכלו לשנות את התוכנית באמצעות שורת המתגים או לשלוט במחולל התהליך באמצעות המחשב. השסתום התאי נפתח ונסגר על ידי אות חשמלי, אך התא מקבל אספקה דרך קו זה.

התאים והמדיום או האגרו-ג'ל מוזנים באמצעות המזרקים. המזרקים נמצאים בתוך המים, ובתוך המזרק מופעל לחץ על ידי אוויר. האוויר בלחץ מסופק ממכל, כפי שניתן לראות בקו זה.

כך, הקו הקטן והאוויר המיונן עוברים דרך מסנן האוויר. מסנן האוויר מסנן את האבק וסוגים אחרים של לכלוך. זהו מחולל הלחץ, המייצר את האות המשמש לפתיחה או לסגירה של שסתום האוויר הסולארי; המחשב מחובר באמצעות מחבר P-I-B-U-S-V.

ניתן להשתמש בחיבור ה-USB באופן ישיר דרך המחשב שלנו, מחשב הלפטופ. חיבור זה מחובר לצד זה כאן. ולאחר מכן נוכל לשלוט באמצעות מחשב הלפטופ המבקר כאן.

לכן, אם ברצוננו לסנכרן את תנועת הבמה ואת פתיחת הפעמון, ניתן לשלוט בהם באמצעות אותו בקר, שהוא מחשב נייד. כך אנו יכולים לשלוט בתזמון הפתיחה, הסגירה, התנועה והעצירה, ולסנכרן את התנועה עם פתיחת הפעמון.

במה זו היא הבמה הממוטרת. היא נעה באופן אוטומטי באמצעות קו אות המוות והמנוע. רזולוציית המנוע היא 0.1 micrometers.

בצורה אידיאלית, הוא יכול לצייר קו באורך של עד 100 millimeter. ציר ההזרקה נע למעלה ולמטה באופן זה, ובכך הוא שולט במרווח שבין התשתית לסרט הסולאר.

כך הוא יכול לשלוט על גובה ההשפרה. תשתית זו מחוברת לבמות ה-XY כאן, X כאן ו-Y שם. לכן היא נעה במישור XY.

לכן הוא שואב דמו של מאפיין בשלביו הימניים, שהם שלושה צירים: X, Y ו-Z. כך שציר הסילון או ציר ה-XY נשלט על ידי אות כאן. קו האות מחובר לבקר התנועה כאן. לבקר התנועה הזה אין שalter ידני כלל, כיוון שאינו ניתן לשליטה ידנית.

השליטה מתבצעת באמצעות המחשב הנייד. לפיכך, המחשב הנייד מחובר. בחלק האחורי של הבקר, יש לנו שלושה צירים עבור תא הדפסה XY jet.

כך הוא מייצר שלושה סוגים שונים של אותות באופן עצמאי. לאחר מכן, בקר התנועה מתקשר באמצעות מחברי rf 2, 3, 2 המחוברים ישירות ל-USV. ואז ה-USV מחובר למחשב נייד.

כך שהשליטה מתבצעת באמצעות מחשב נייד. אנו משתמשים בתוכנת AutoCAD, יוצרים נתיב G-code באופן הזה, ולאחר מכן הוא מומר לשפת מכונה.

כך שפת המכונה מועברת כתווים ומספרים פשוטים. לכל מיקום קיימת התייחסות לבמות X, Y ו-Z; כאן אני בוחר את הקובץ המכיל את סוג התכנית הזה, ולאחר מכן פותח את הורדת התכנית בדרך זו. ואז אני בוחר מהקובץ, בדיוק באותו אופן, את קובץ הטקסט.

רק קובץ הטקסט יורד, בחרו בקובץ הטקסט והורדה תתבצע באופן אוטומטי מהמחשב הנייד לבקר התנועה של ה-com motion, ולאחר מכן הוא יעבור לתו BAM כפי שציינתי קודם לכן, BAM. בבקבוק זה נמצאים תאי פיברובלסטים של עכברים מסוג NIH 3G. ראשית, אני אשאב את כל המצע.

תהליך זה נועד להעביר את התאים, כאשר התאים דבקים לתחתית הבקבוק. לכן, לאחר שאיבת המדיום, אני אהוסיף ששה מיקרוליטר של טריפסין, שהוא אנזים. לאחר שהטריפסין הוכנס לבקבוק, עלינו להמתין שלושה עד חמישה דקות עד שהתאים ינשלטו מהתחתית של הבקבוק.

כעת אנו מוכנים להוסיף את המצע ולהעביר את התאים למבחנה לצנטריפוגה. זהו דילול של 1:1. לכן, אני מוסיפה 6 mL מהמצע הזה כאן, ואני אשטוף מעט את התאים כדי לוודא שכולם הועברו.

כעת התאים מוכנים לסבב צנטריפוגה בפעולה זו בתוך המבחנה. כעת נסובב את התאים במהירות של 1,000 RPM למשך 3 עד 5 דקות. כעת, לאחר שהתאים שקעו למשקע, אשאב את הנוזל העליון (supernatant).

כעת אני אשטוף את התאים עם PBS. פעולה זו נועדה לשלב צביעת התאים. הצבעים שבהם אנו משתמשים הם סובסטראטים של אסטראז.

כעת נבצע סבב צנטריפוגה נוסף כדי לשקיע את התאים למשקע. אשאב את ה-PBS ואשחזר את התאים לתוך מדיום לצורך ספירה.

אני מערבב את התאים כך שבעת דגימה שלהם, הריכוז יהיה אחיד לאורך כל המבחנה. כעת אני לוקח 100 µL של התאים כדי למדוד את צפיפות התאים. כעת אני מוסיף 100 µL של trypan blue, שהוא צבע.

נמתין שלוש עד חמש דקות כדי לאפשר לצבע לחדור דרך ממברנות של תאים מתים. בעת ספירת התאים, לא נספור את התאים הכחולים. התאים מוכנים לספירה באמצעות המוציטומטר (hemo cytometer), ואעביר 50 µL מתערובת התאים לכל צד של ההמוציטומטר.

בסדר, אני אכסה זאת באמצעות פלשטר זכוכית. ל-hemo cytometer יש שני צדדים. אני אספור את הצד הראשון, ולאחר ספירת שני הצדדים, אחשב את הממוצע ואכפיל אותו בשניים, כיוון שביצענו דילול של 1:1 עם ה-trypan blue.

אם כך, צפיפות התאים שלנו תהיה 135 כפול 10 לraising 4 תאים למל. עבור הניסוי שלנו, נשתמש בתמיסת תאים בריכוז של חצי מיליון תאים למל. ומכיוון שיש לנו 13.5 מיליון תאים, אני אשחזר את התאים ב-27 מל של מצע גידול.

אנו משתמשים בשני סוגים שונים של צבעים. זהו מבחן חיות-מוות (live dead assay) מבית Molecular Probes. הצבע הראשון שלנו נקרא calcium am.

הצביעה השנייה שלנו נקראת AUM homodimer. היא צובעת תאים מתים. אנו משתמשים בעירור כחול כדי לקבל פלואורסצנציה ירוקה ובעירור ירוק כדי לקבל פלואורסצנציה אדומה. עבור שתי צביעות אלו, בעת הדמיית הדגימות, תמיסת הצביעה תוכרח ב-PBS.

ראשית, אעביר 5 mL של PBS (סלוציון סלין עם בופר פוספט) למבחנה. זהו תמיסות סלין. כעת אוסיף 0.5 µL של calcium am per mil.

כעת אני מוסיף 2.5 µL של calcium am לשפופרת ושני µL של athe homodimer לכל מ"ל של PBS. כאן נמצא מכשיר ה-btex. הוא דואג לפיזור אחיד של התאים והמצע בכל הנפח.

כעת נטען 200 µL של תאים אל תוך המזרק. לאחר מכן נסגור את הפקק, זהו חריץ אטום היטב באופן הזה. אני פותח את השסתום, ואז האוויר נכנס בלחץ, ולאחר מכן אני מכוון את השסתום כך. ובכך משתנה הלחץ.

לכן אני מכוון. הלחץ הוא 5 PSI. הלחץ בתוך הצינור הוא 5 PSI.

מכאן ועד כאן, החיבור התבצע באמצעות ה-this בתוך החור. לכן, אנו פותחים את הפעמון כאן, ואז התא מוזרק בלחץ של 5 PSI ולאחר מכן נפתח. לאחר מכן, שסתום הסולנואיד מתחיל לפעול.

לאחר מכן אנו גולגלים את התשתית. התשתית היא פשוטהית זכוכית רגילה. לאחר מכן אנו טוענים את הכמות המתאימה, ואני מדביק סרט דביק כדי לקבע את התשתית באופן הזה, נכון?

ואני פשוט מקבע זאת. אנו מגדירים את כל המערכת – התא, שסתום ה-ary והמצע – ובמהלך תנועת ה-ary הוא מתחיל לפעול. לפיכך, אנו מקבלים את כל המערכת ואז פותחים את שסתום ה-ary להתחלה.

ואז אנחנו מזיזים את השולחן כך, נכון? ואז אנחנו יוצרים תבנית על התשתית, תבנית על התשתית, ובום - תו. אני עומד לטבול את הטיפות שהדפסנו בתמיסת הצבע שהכנו קודם לכן.

כעת הטיפות יודגרו למשך 10 דקות ולאחר מכן יצולמו. ראשית, אכוון את התמונה דרך העינית. התמונה הראשונה שלנו היא תמונת שדה בהיר בלבד.

אני אכבה את האור ואחליף את המסנן כך שנקבל עירור כחול, אשר יראה פלורסצנציה ירוקה. ואת התמונה השלישית שנצלם היא של התאים המתים, שזהו הצביעה של Thm Homodimer. ועם אור ירוק, נקבל פלורסצנציה אדומה.