תלת-ממדי (3D)-להדפיס תבנית עבור תפוקה גבוהה דג זברה העובר סידור במערך

שיטה זו יכולה להאיץ משמעותית את הליך סידור העוברים של דג הזברה ולהפוך את דג הזברה למתאים באמת לבדיקת תפוקה גבוהה. היתרון העיקרי של טכניקה זו הוא השימוש בתבנית מודפסת בתלת מימד כדי לסדר מראש עוברי דג זברה למטריצת באר של 96 או 384, מה שמקל על תהליך הכנת צלחת יעיל ביותר. הרעיון לשיטה היה לנו לראשונה בעת ביצוע סינון של ננו-חלקיקים על ידי בחירה ידנית של עוברים בודדים לכל באר של צלחת מודולרית ורצינו להגביר את היעילות.

בנוסף לטיאן-יו, סטודנטית לתואר שני יואה ג'יאנג תדגים את ההליך. התחל הליך זה בתכנון תבנית המערך עם פריסה של שתים עשרה על שמונה 96 בארות המתאימה לצלחת סטנדרטית של 96 בארות. כמפורט בפרוטוקול הטקסט.

השתמש במדפסת תלת מימד עם דיוק של 0.1 מילימטר כדי להדפיס את התבנית. כמה מרכיבי המפתח של התבנית הם תא הלכידה, באר הלכידה, תא הוואקום ויציאת האוויר פנימה. כדי לבצע את השרצת העובר של דג הזברה, תחילה הפרד זכרים ונקבות על ידי מפריד פלסטיק שקוף.

לאחר מכן, הניחו שני זוגות של דגים זכרים ונקבות לכל קופסת הזדווגות יום אחד לפני ההשרצה. ביום ההטלה, הסירו את המחיצות בבוקר כדי לערבב דגים זכרים ונקבות. הסר את הדג הזכר והנקבה ואסוף את עוברי דג הזברה באמצעות מסננת רשת דקה.

שוטפים את העוברים עם 250 מיליליטר מי ביצים. העבירו את העוברים שנאספו לצלחות פטרי עם הפתרון של הולטפרטר. הסר את העוברים המתים והלא מופרים באמצעות מיקרוסקופ סטריאו.

מניחים את העוברים באינקובטור של 28.5 מעלות צלזיוס. ארבע שעות לאחר ההפריה, התבוננו בעוברים והוציאו את כל העוברים המתים והלא בריאים. העוברים מוכנים כעת לשלב הבא.

שטפו את התבנית פעמיים-שלוש עם 500 מיליליטר מים נטולי יונים לפני הכנסתה לתנור הייבוש למשך חמש דקות. לאחר מכן, הדביקו את החדר התחתון עם סרט איטום חתיכה. חבר משאבת ואקום דרך יציאת האוויר בתחתית התבנית כדי ליצור לחץ שלילי בתא האטום על ידי סרט האיטום.

בעזרת פיפטת העברה מפלסטיק, הניחו כ -150 עוברים בתבנית. מנערים את כל התבנית אופקית עד שבכל באר יש עובר אחד לכוד. בשלב זה, חשוב לבדוק ולוודא על כל עובר דג זברה זמין.

אם המאגר של הולטפרטר היה נמוך מאוד, אפשר היה להוסיף מאגר נוסף על ידי ניעור התבנית. השליכו עודף תמיסת הולטפרטר ועוברים שאינם לכודים בבארות. כבה ונתק את משאבת הוואקום.

הניחו צלחת סטנדרטית של 96 בארות הפוכה על התבנית וסובבו את שניהם בו זמנית. הקש על תחתית התבנית או חבר את יציאת האוויר לפחית אבק גז דחוס כדי להעביר את כל העוברים הלכודים מהתבנית לצלחת 96 הבארות. לבסוף, הסר את סרט האיטום ושטוף את התבנית שלוש פעמים מלמעלה למטה עם 500 מיליליטר מים נטולי יונים לשימוש עתידי.

מוצגת כאן תמונה חלקית של צלחת 96 בארות המסודרת על ידי התבנית. לעומת זאת, תמונה זו מציגה את התמונה החלקית של צלחת 96 בארות מסודרת ידנית. המצב הבריאותי הכללי של העוברים לאחר ציפוי בשיטות ידניות ותבנית מערך מוצג כאן.

בהתבסס על שיעורי הבקיעה, ההישרדות והמומים של העוברים, לא נצפו השפעות משמעותיות על הבריאות הכללית של העוברים בשני המקרים. לאחר שליטה, טכניקה זו תכין צלחת באר אחת של 96 או 384 תוך שתיים-שלוש דקות בלבד אם היא מבוצעת כראוי. לאחר פיתוחה, טכניקה זו סללה את הדרך לחוקרים לנצל את מלוא התכונות החדשות של אורגניזם מודל זה ולהשיג באמת סינון תפוקה גבוהה במבחנה.