Le uova di pollo finestre di Studi sullo sviluppo

Benvenuti al Kramer Lab. Sono Matt Korn, dipartimento di Neurobiologia e Comportamento presso l'Università della California di Irvine. Oggi vi mostrerò come preparare uova di pollo per diverse manipolazioni, inclusa la collocazione di microsfere, l'iniezione di coloranti o l'esplorazione in ovo.

Quindi, senza ulteriori indugi, iniziamo. Bene, procederemo a pulire l'uovo. Il motivo è che nell'incubatrice potrebbero essersi depositate numerose sostanze.

Chiuderemo questo con del nastro adesivo. Non vogliamo che piccole particelle penetrino nell'area in cui la finestra verrà aperta per accedere all'uovo, aumentando così la probabilità che l'embrione muoia prima che lo preleviamo. Quindi, come avete visto dall'incubatrice, le uova sono posizionate con il lato più grande rivolto verso l'alto.

Quello che faremo è prendere l'uovo e girarlo semplicemente di lato. Questo avrà due effetti: innanzitutto, la nostra finestra si troverà proprio qui, e in secondo luogo, l'embrione dovrà galleggiare verso l'alto in modo da poter effettuare qualsiasi tipo di manipolazione.

Quindi ne preleverò alcuni dal rack che si trovava nell'incubatrice per posizionarli in un portauova di cartone. Questo è effettivamente il supporto incluso nella confezione al momento della consegna delle uova. Pertanto, per oggi procederemo a utilizzarlo semplicemente per sostenere le uova.

Ora, la disposizione è a vostra discrezione. A me piace procedere in questo modo perché posso accedere a tutte le uova in qualsiasi momento e nessuna tocca l'altra. Nel caso ne trovassi una allentata, con una crepa, e la facessi cadere, tutte quanti avrebbero comunque un po' di spazio tra loro.

Prenderò quindi la mia garza e ne preleverò una bella pila come questa, dividendola in due. Prenderò l'alcol al 70% e la riempirò fino a quando non sentirò che il fondo sta diventando umido. Questo perché userò l'intera pila per strofinare tutte le uova.

Quindi prenderò solo qualche goccia dalla superficie, andando avanti e concentrandomi realmente sulla parte superiore, ma in pratica coprendo quasi interamente l'uovo. Una volta terminato, l'alcol si asciuga molto rapidamente e possiamo procedere applicando del nastro. Il nastro aderirà bene e, entro il tempo in cui avrò completato un gruppo, di solito il primo sarà già asciutto, permettendoci di passare al passaggio successivo della preparazione dell'uovo.

Quindi, rimettiamo nuovamente questo nel cestino e siamo pronti per passare al passaggio successivo. Bene, ora che tutte le nostre uova sono state tamponate con l'alcol, possiamo procedere a creare un foro di drenaggio nel lato grande dell'uovo, alla base dell'uovo. Questo ci permetterà di intervenire ed estrarre un po' di albume, perché se non rimuoviamo l'albume l'embrione non si posiziona correttamente.

Non possiamo effettuare alcuna manipolazione. Quindi si tratta semplicemente di prendere una lama e questo nastro di plastica. È leggermente elastico, il che è ottimo.

Non solo ci permette di espanderci su un foro se è leggermente più grande di quanto vorremmo, ma quando copriremo effettivamente l'intero uovo, dovremo allungare questo materiale. Quindi la zona in cui sarà posizionata la finestra deve essere completamente coperta. Perciò procederò semplicemente a tagliare questo pezzo in questo modo, creando poi una striscia di circa un millimetro.

E poi da questo posso ricavare un pezzetto di nastro largo circa un millimetro quadrato. Quindi procederò semplicemente a posizionarlo appena sopra a sinistra rispetto alla data. Mettetelo proprio lì e potrete vederlo.

Aderisce molto bene. Poi posso tornare alla striscia che ho già preparato, tagliando un altro pezzo di nastro lungo un millimetro. E nuovamente, posizionarlo semplicemente a sinistra del numero indicato, che corrisponde in realtà alla parte superiore dell'uovo.

Ora che l'abbiamo ruotato lateralmente, è sulla destra. E un altro pezzo qui. Ora non indosso guanti perché indossarli farebbe aderire il nastro ai guanti stessi e ho già lavato le mani.

Non sono particolarmente preoccupato per eventuali contaminazioni dell'attivo in questa fase. Quindi procederò prendendo un paio di forbici con la punta affilata. Entrerò al centro del punto in cui ho posizionato il nastro e girerò in senso antiorario e poi orario fino a quando non si romperà leggermente.

E vedrai che c'è un piccolo foro lì. Ora, il foro non deve essere molto grande perché, una volta inserita questa siringa, si allargherà a sufficienza. Questo passaggio serve per evitare di entrare direttamente con un ago e cercare di rompere l'uovo in quel modo, poiché spesso ciò provocherebbe la frantumazione dell'intero lato dell'uovo.

Quindi non possiamo più utilizzare l'uovo. Ok, ora procederò a svuotare l'uovo. Abbiamo quel piccolo foro laterale e userò questa siringa da 10 millilitri e un ago abbastanza spesso per estrarre l'albume.

Ora voglio circa tre o quattro millilitri, sicuramente più di tre, non molto più di quattro e mezzo o cinque. Questo permetterà all'embrione, che ora si trova in cima, di allontanarsi leggermente dal guscio. E poi potremo effettuare le nostre manipolazioni.

Pertanto, entrando con un angolo di 45 gradi, mi trovo al di sotto del tuorlo. Poi voglio semplicemente ruotare leggermente verso destra per infilarmi sotto, e si può avvertire la punta dell'ago che tocca appena il fondo dell'uovo. Procederò quindi con l'aspirazione di circa tre o quattro microlitri, ed esce abbastanza bene.

Procederò ora a mettere quell'albumina nel mio contenitore qui e potrò continuare con le altre uova. Ok, quindi procederò. E vedrete che il foro che ho praticato per lo spurgo è un po' più grande di quanto avrei desiderato, ma in realtà ciò si rivela accettabile.

Ciò di cui voglio preoccuparmi è che, mentre inserisco l'ago, non si crei un'ulteriore incrinatura. Quindi procederò pure. Ok, riesco già a vedere che l'uovo presenta una piccola crepa.

Ora piccole crepe vanno bene, ma bisogna preoccuparsi quando si estendono a un altro piano dell'uovo. E in questo caso accade. Potete notarlo dal foro.

Arriva praticamente fino in cima. E proprio qui andrà posizionata la nostra finestra. Purtroppo, per questo uovo, dovremo procedere a scartarlo.

E non c'è nulla di particolare nello smaltirlo. Non è necessario redigere un protocollo specifico o altro. Basterà semplicemente metterlo nel contenitore dei rifiuti.

Utilizziamo questi contenitori neri per la spazzatura per designarli come rifiuti animali, ma a parte questo, è già stato provveduto. Possiamo passare all'uovo successivo. Ok, ora che abbiamo svuotato tutti i nostri uova, possiamo procedere a coprire il foro di drenaggio.

Ora questo è importante perché, se non lo facciamo all'interno dell'incubatrice, potremmo assistere a un'evaporazione notevole di ciò che rimane dell'albumina. E un uovo secco è un uovo morto. Quindi andremo avanti e prenderemo un pezzo di nastro adesivo di dimensioni simili, posizionandolo sopra il foro; in questo modo non dovremo preoccuparci di dover intervenire nuovamente in questo foro.

In alcuni casi, se si decide di provare a prelevare ulteriore albume da un uovo, una volta aperto, questo foro funge da area parzialmente sigillata in cui è possibile inserire un ago senza perdere una grande quantità di albume. Va bene, vero? Bene, ora procederemo a coprire le uova con un pezzo di nastro di dimensioni adeguate.

E in qualche modo paragono questo all'atto di mettere un pezzo di nastro adesivo su un palloncino prima di infilarvi un piccolo spillo. La cosa interessante è che il palloncino non scoppia e, in questo caso, un piccolo nastro sull'uovo. L'uovo non si incrina in più punti e quindi la finestra può essere sigillata; quando la finestra si chiude, poiché abbiamo usato il nastro, si crea una bella chiusura ermetica e non dobbiamo preoccuparci di alcuna evaporazione.

Quindi puoi vedere che la dimensione del nastro è probabilmente la più grande che abbia tagliato finora, ma anche in questo caso andrò avanti e lo allungherò leggermente, tirandolo appena con una lieve tensione, e lo posizionerò sull'uovo. Poi girerò dietro e lo stenderò con molta attenzione sull'uovo, in modo che non ci siano pieghe proprio nella zona in cui si troverà la mia finestra. Puoi riaggiustare un po' il nastro.

Non si attacca così tanto da doverci preoccupare. Una volta che è attaccato, è attaccato. E potete vedere che questa zona generica qui è dove andrò avanti e taglierò la finestra.

Bene, ora che abbiamo applicato il nastro su tutte le uova, possiamo procedere a tagliare una finestra nella parte superiore. Questa può essere la parte più difficile e spesso è qui che si perdono la maggior parte delle uova. Quindi procederò semplicemente a pulire bene le forbici con una garza imbevuta di alcol e poi le asciugherò.

L'alcol si asciuga quasi completamente da solo, ma non si vuole che l'alcol entri direttamente nell'uovo. Quindi andrò proprio al centro della zona del nastro e, ancora una volta, userò quel movimento in senso orario e antiorario finché non sento che si rompe un pochino. A quel punto so che la mia lama è entrata.

E poi voglio spostare un po' le mie forbici in modo che siano quasi piatte rispetto alla superficie dell'uovo. Quindi faccio piccoli tagli fino a quando riesco a inserire completamente la punta delle forbici all'interno. Una volta creato un semicerchio, torno indietro nell'altro senso; non voglio completare il cerchio perché desidero lasciare una finestrella, ma a quel punto posso semplicemente aprire l'uovo.

E al momento sembra che abbiano all'incirca l'età che mi aspettavo, non hanno molte navi sanguigne, ma c'è un po' di sangue intorno alla zona in cui si trova l'embrione, proveniente principalmente dalla regione del delion, da cui il sangue ha ora iniziato a fuoriuscire e il battito cardiaco è cessato. Quindi chiuderò semplicemente qui, lasciandolo appoggiato così com'è, girerò intorno di nuovo e poi chiuderò le finestre. E ancora una volta, appiattirò delicatamente sulla superficie e tornerò indietro dall'altro lato.

E va bene, qui abbiamo un paio di bolle e risulta che l'embrione si trova da un lato. Ora possiamo fare due cose. Se abbiamo abbastanza uova e non ci preoccupiamo di utilizzarle tutte, possiamo procedere e scartare questa.

O possiamo chiudere la finestra e regolare semplicemente in modo che l'embrione risalga in superficie, nella posizione desiderata. Entro il momento in cui interveniamo con le nostre manipolazioni, potrebbe trovarsi nel punto voluto. In caso contrario, possiamo scartarlo a quel punto.

Quello che ho fatto qui è semplicemente posizionarlo con un angolo. Avrete un leggero deflusso di albumina, ma questo aiuterà l'embrione a tornare nella posizione corretta. Bene, ora che abbiamo tutte queste aperture, dobbiamo assicurarci che siano chiuse e vogliamo che rimangano chiuse prima di effettuare qualsiasi manipolazione.

E poi possiamo procedere a sigillare nuovamente l'uovo. Tuttavia, se c'è una finestra aperta, a volte il tuorlo può fuoriuscire. Se sapete che l'uovo si inclina leggermente mentre passate da una stanza all'altra, non volete certo che il contenuto fuoriesca completamente.

Quindi sto semplicemente tagliando un altro pezzo di nastro di plastica largo un millimetro, probabilmente lungo due o tre millimetri. E mi piace posizionarlo proprio al centro. Se riesco a tirarlo verso il basso davanti all'uovo, lo rende abbastanza teso.

E puoi vedere dove si inserisce il foro, esattamente dove c'era il nastro precedente, dove abbiamo tagliato il foro, rendendolo abbastanza sigillato per il momento. Cioè, tra poco procederemo con alcune manipolazioni, quindi non è necessario che sia completamente a tenuta d'aria. Questo è il modo in cui si preparano e si apre un foro nelle uova.

In bocca al lupo per i vostri esperimenti.