薬理研究に単離された組織のバース·アプリケーションにおける平滑筋機能の測定

この手順の全体的な目標は、平滑筋の緊張を測定することです。これは、最初に組織を解剖して準備することによって達成されます。2番目のステップは、隔離されたティッシュバスに組織をマウントすることです。

次に、組織の生存率がテストされ、等尺性収縮測定が行われます。最終的に、単離された組織浴調製物は、受容体機能、受容体シグナル伝達、および平滑筋反応性をテストするために使用されます。一般的に、 この手法の主な利点は、システムの柔軟性、結果を達成する速さ、および組織全体を無傷に保つことです。

この方法は、受容体のシグナル伝達や平滑筋の魂を妨害するために薬物を使用する任意の分野で重要な質問に答えるのに役立ちます、 ストレスを感じなければならないいくつかの準備があります。再循環式温水浴をオンにして、ティッシュバスシステムを摂氏37度に予熱することが重要です。水は、最も低いバーブ接続部で各コンポーネントに流れ込み、最も高いバーブ接続部で流出する必要があります。

各コンポーネントは接続する必要があります。力変換器は校正する必要があり、実験の少なくとも15分前に電源を入れて温度を平衡状態にする必要があります。次に、ガスを接続するときは、漏れがないかチェックしてから、システムを加圧します。

システムに溶液を充填した後は、必ずプライミングを行い、気泡を取り除いてください。ティッシュバスエアレーターのテストも保証されています。良好な通気は薬物を効果的に分配しますが、実験の直前に組織を不安定にすることはありません。

組織を解剖します。ラットに麻酔をかけた後、ハサミを使用して気胸を作成します。胸郭の下部にある横隔膜に沿って咥えます。

次に、胸郭の底から胸骨まで切り取り、組織を二等分します。脊柱の上の臓器を片付けて、脊柱に直接沿う大動脈を見つけます。次に、大動脈へのすべての接続を切断し、横隔膜のレベルで脊椎に垂直な大動脈を切断します。

次に、大動脈をそっと持ち、背骨から大動脈を解剖します。背骨に隣接する下横隔膜の領域から始めて、心臓に向かって作業します。ただ、大動脈組織を引っ張ったり引っ張ったりすると、すぐに損傷を受ける可能性があるため

PSSを含む解剖皿に大動脈を置きます。.次に、ワイヤーを取り、90度の小さな角度を作ります。一方の端で、ワイヤーの角度のついた端を解剖皿の基礎に固定します。

次に、ガイドワイヤーを大動脈の内腔に慎重にねじ込み、大動脈をワイヤーにスライドさせます。ワイヤーの自由端が見えてきたら、ワイヤーをそっと曲げて土台に押し込み、組織を安定させます。次に、小さな金星のはさみと鉗子を使用して、胸部大動脈が白く、やや繊維状に見えるまで、血管周囲脂肪組織やその他の外部組織を取り除きます。

余分な組織を取り除いたら、ワイヤーからきれいな大動脈を慎重に取り外します。このセクションを、大動脈を3〜5ミリメートル幅のリングに切断して終了します。リーチ大動脈リング。

お風呂の部屋に固定するために、縫合糸付きのティッシュフックを2つ用意しています。1つのフックには、ロッドに取り付けるための小さな結び目のあるループ付きの縫合糸が必要です。もう一方のフックには、10〜14センチの長さの縫合糸が必要です。

結び目を結ぶには、これらの組織フックのペアを各大動脈リングに慎重に取り付けます。フックが絡まらないように注意してください。次に、各ティッシュピースを室温のPSSの皿に移し、ティッシュホルダーをリングスタンドに固定します。

次に、結び目のあるループをロッドのペグに滑り込ませ、長い縫合糸を使用して組織を支えます。次に、ロッドをチャンバーに入れ、ロッドが固定されていることを確認します。次に、残りのフックからの縫合糸を力変換器に結びます。

縫合糸に十分なたるみを残して、力変換器と組織の間の張力をマイクロメーターで調整できるようにします。各チャンバーの各リングについて、このプロセスを繰り返します。次に、パッシブテンションを設定します。

マイクロメーターを使用して張力を2グラムに増やし、組織の張力の増加が止まるのを待ちます。次に、張力をさらに2グラム増やし、再び張力の変化を待ちます。仕上げます。

張力は約3.2グラムになるはずです。各チャンバーの各リングでこのプロセスを繰り返します。すべての受動的な張力を設定した後、組織を1時間平衡化させます。

この間、PSSを15分ごとに交換し、平衡化期間の終了時に薬物を調製するなど、実験のための他の準備を行います。最後にもう一度ティッシュを洗浄し、データを保存し、すべての入力をリロします。次に、テキストプロトコルの詳細に従って、最初のチャレンジを行います。

これらのアクションは、必ずソフトウェアに文書化してください。最初のチャレンジの後、テンションの変化は横ばいになります。次に、チャレンジ薬を洗い流して、組織のトーンがベースラインに達するようにします。

このベースライントーンで組織を約10分間休ませ、この場合は車両で一方の浴槽に、もう一方の浴槽に水を注ぎます。浴中で5ナノモルの濃度に十分なプラゾシンを添加します。ティッシュバスを洗わずに1時間インキュベートします。

その間、フェノールラインは対数曲線に沿って広範囲の濃度で修復します。1時間後、濃度を上げてフェニルラインアゴニストを浴に加え、累積濃度反応を生成します。.各添加後、組織がプラトーに反応するのを待ってから、次の濃度を添加します。

組織のトーンが変化しなくなるまで、または全体の反応曲線が頭打ちになるまで、追加を続けます。むしろ、胸部大動脈は、α 1 アドレナリン受容体拮抗薬 POZ sim で 1 時間インキュベートされ、その後、α one アドレナリン作動薬フェニル ラインを組織浴に加え、フェニル ラインの最大収縮と半最大収縮の累積収縮応答曲線を生成しました。車両のみでは、コントロールティッシュは緑色でマークされています。

半値最大値は、薬物の有効濃度を示します。ラジン処理された組織についても同じ測定値が黒で見られます。このビデオを見れば、孤立した組織浴で平滑筋の機能を測定する方法についてよく理解できるはずです。