2018年8月22日
このプロトコルは、卵除去実験を実行するためのガイドラインを提供します: アウトライン化実験的絵画卵自然鳥の卵、フィールドワークを実施し、収集したデータを分析の色をエミュレートするモデル。このプロトコルは、匹敵する卵除去実験を行うための統一された方法を提供します。
この方法は、宿主が自分の卵子と寄生虫の卵子をどのように区別できるかなど、進化生態学の分野における重要な質問に答えるのに役立ちます。この技術の主な利点は、卵子拒絶実験を実施するための再現性のある技術を提供することです。まず、3Dプリントまたは彫刻されたモデルの卵の上に、チタンホワイトの均一なコートをペイントします。
涼しい環境でヘアドライヤーを使用して、乾燥を早めます。乾いたら、卵に高品質のアクリル絵の具を塗って、独特の外観にします。シミは、まず手でブラシで追加し、次に歯ブラシで塗料を飛び散らせます。
色を定量化するには、分光計を使用します。まず、分光器にSDカードを挿入します。SDカードをシステムにリンクするには、コントロールから[ファイルシステム]を選択し、[SDカードの検索]を選択します。
これを完了するには、ホームボタンを押します。次に、光ファイバーケーブルを分光器と光源に取り付けます。ケーブルに従って、正しい端を正しいコネクタに固定します。
次に、カスタマイズされたプローブチップを光ファイバープローブの端に挿入します。先に進む前に、プローブチップを95%エタノールで洗浄してください。次に、下ボタンを3回押して光源をオンにします。
まず、[PX Lamp]を選択し、次に[Setup]を選択し、最後にタイミングコントロールから[Free Running]を選択します。次に、少なくとも15分待ってから測定を行い、機器をウォームアップします。マシンがウォームアップしている間、卵と最高の信号対雑音比を持つプローブとの間の標準化された距離を使用して色を測定することに注意してください。
約5ミリメートルから始めて、そこから調整します。マシンがウォームアップされたら、キャリブレーションを行います。まず、ホームボタンを押して[ツール]を選択します。
次に、メニューから [手動制御] を選択し、 [パラメーターの取得] を選択します。次に、ボックスカーのスムージングを設定します。カーソルを右に2回移動し、上ボタンを使用してボックスカーの設定を5に増やします。
緑色の承認ボタンを使用して変更を保存します。次に、右、右、下を押してナビゲートし、平均を 10 に設定します。上ボタンを使用して10桁の数字をスクロールし、次に1つの位置を右にして、1桁の位置を設定します。
完了したら、緑色の同意ボタンを押します。次に、ホームボタンを押して、[リフレクタント]オプションを選択します。次に、プローブを白い標準にしっかりと置き、上ボタンを押して保存した値を保存します。
次に、プローブを光から離れた暗い場所に置きます。次に、右スクロールボタンを押して暗い標準を保存し、メニューダウンボタンを押して反射体を表示します。次に、各卵殻の反射率を6回測定します。
鈍角の極の近くで 2 回、赤道で 2 回、鋭角の極で 2 回。スポットが回避されたかどうかは必ず報告してください。これらの測定は、実験卵子と、実験卵子が複製することを意図している天然宿主卵の両方に対して実行します。
通常の注意を払って監視対象の巣に近づいてください。次に、実験用の卵を巣のカップの側面にスライドさせて、宿主の巣にそっと加えます。実験モデルは、宿主の卵子を損傷する可能性があるため、落とさないでください。
鳥が卵の導入を見ないこと、または避けられない場合は、実験時の存在が統計的に制御されることが非常に重要です。私たちは、これが彼らの拒絶行動を説明するのに役立つという証拠を多くの種で見つけました。退却する前に、常に各巣に同じ時間留まります。
数時間以内に、そしてその後定期的に、すべての巣を再訪して、実験卵に対する宿主鳥の反応を判断します。ネストをチェックするときは、伸縮ミラーを使用して、ネストまたはクラッチに直接接触しないようにしてください。ひな寄生研究で使用される塗料混合物は、スペクトル形状と大きさの点で自然反射率の測定と密接に対応している必要があります。
それが紫外線と可視範囲の両方で達成された場合、実験卵子の色は宿主に自然な色の卵として認識されるはずです。鳥類の色知覚は、4つの光受容体を使用して達成されます。これら4つの光受容体からの量子キャッチは、四面体色空間内の座標に変換でき、各頂点は特定の光受容体の相対的な刺激を表します。
この色空間に、塗装された卵の座標をプロットできます。ドットの色は、人間が見る卵の色です。ほとんどの研究では、宿主は、寄生卵と自分の卵子の違いなど、形質の非類似性に絶対的または対称的に反応すると仮定しています。
しかし、ほとんどの形質は複数の次元に沿って変化し、表現型空間全体でそれらの応答が類似していると想定する先験的な理由はありません。表現型の範囲全体にわたって形質を操作する研究は、この仮定に異議を唱えています。アメリカのコマドリが自分の卵の明るい青色からますます異なる卵を提示されたとき、彼らは自分の卵よりも青い卵よりも頻繁にそれらを拒絶しました。
アメリカのロビンはまた、斑点のある実験的な卵を、卵殻の青緑色よりも茶色であると認識すると、拒否する可能性が高いことがわかりました。ロビンは斑点のない卵を産みますが、彼らの寄生虫である茶色の頭の牛の鳥は茶色の斑点のある卵を産むため、卵はアメリカのコマドリの卵よりも茶色く見えるため、反応は適応しているように見えます。このビデオを見れば、卵子拒絶実験の実行方法についてよく理解できるはずです。
この手法を習得すると、同等の結果を生み出すことができます。この手順を試行するときは、コントロールネストからデータを収集することが重要です。これは、実験的な処理に反応してホストが巣を放棄したかどうかを判断するのに役立ちます。
野生動物を扱う際には注意を払うことを忘れないでください。巣を頻繁に訪れること、巣に印をつけない、可能な限り異なる場所から巣に近づいたり出たりするなどの予防措置を守ることが重要です。ご覧いただきありがとうございます、そしてあなたの実験に頑張ってください。
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本プロトコールでは、卵の拒絶実験を実施するためのガイドラインを提供し、実験用卵モデルの塗装技術および収集データの分析方法について詳細に解説します。これにより、進化生態学の研究者が比較可能な実験を行うための標準化された手法を提示します。
本プロトコルは、宿主-寄生虫系における表現型応答を定量化するための標準化されたアプローチを確立し、再現可能な行動アッセイのためのフレームワークを提供します。表現型勾配に沿った識別閾値を精密に測定することを可能にすることで、表現型のばらつきが解釈を困難にする標的検証研究におけるメカニズム的なリスク低減を支援します。本手法は、生物学的関連性と相関する定量可能な出力を定義することで、スクリーニングプラットフォームにおける予測信頼性を高め、研究間の比較可能性を促進し、初期探索における偽陽性を減少させます。
本手法は、初期生物学における仮説検証のサポート、スクリーニングのためのアッセイ標準化の可能化、および分析のための定量的な行動出力の生成を通じて、ディスカバリー・コンティニュアムに適合しており、ホスト応答の連続性をモデル化する上でトランスレーショナルな関連性を有しています。