Enukleacja oka myszy w celu zdalnego wysokoprzepustowego fenotypowania

W tym filmie zaprezentowano oko myszy oraz proces enukleacji, czyli usuwania gałki ocznej z oczodołu. Gałka oczna jest ograniczona dolną krawędzią powieki. Tutaj znajduje się kąt przynosowy, czyli przyśrodkowy.

Z tyłu znajduje się kącik zewnętrzny lub boczny. Powyżej widoczna jest krawędź górnej powieki. Oto preparat chirurgiczny.

Igła wskazuje na przejrzystą rogówkę. Widać niewielką część soczewki wystającą poza tęczówkę. Tęczówka znajduje się tutaj, jest brązowa i zakrywa soczewkę.

Najważniejszym punktem orientacyjnym podczas operacji jest ta biała linia, czyli limbus; otwór zostanie wykonany tuż za nią. Tylna połowa gałki ocznej znajduje się za limbusem; tutaj wskazujemy miejsce przyczepu mięśnia. W tym miejscu widać mięsień przylegający do gałki ocznej, a następnie tkankę łączną wypełniającą oczodoł, w skład której wchodzi gruczoł łzowy.

I na koniec, jest to biały, długi odcinek nerwu wzrokowego uzyskany w wyniku rozcierania. Używając zakrzywionej pęsety chirurgicznej z dostosowanym ostrym końcem, należy rozpocząć od rozsunięcia powiek. Pozwala to na wypchnięcie oka i odsunięcie go.

Ostrożnie wprowadź pęsetę do oczodołu, za gałkę oczną, delikatnie ją uciśnij za gałką, nie ściskając jej, i pociągnij do przodu. Powinno to pozwolić na chwycenie tkanki łącznej, a nie gałki ocznej. Po odsunięciu gałki ocznej na bok można zobaczyć tkankę oczodołową wraz z białym nerwem wzrokowym.

Jest to druga sekcja, przeprowadzona jedynie po to, aby ponownie pokazać, że należy wprowadzić narzędzia w okolicy kąta oka, przesunąć pęsetę za gałkę oczną, uchwycić tkankę łączną i pociągnąć ją do przodu, nie naciskając przy tym samej gałki ocznej. Ponownie można zauważyć tkankę łączną w postaci długiego, białego pasma nerwu wzrokowego. Aby wykonać ranę kłutą, należy uchwycić gałkę oczną za miejsce przyczepu mięśnia i wprowadzić igłę za limbus, tuż obok miejsca trzymania oka w celu jego stabilizacji.

Pozwoli to na wniknięcie utrwalacza do wnętrza oka. Jeśli wykonasz nakłucie w znacznej odległości od miejsca trzymania oka, gałka oczna będzie bardzo niestabilna, a wykonanie rany o takiej długości będzie trudne, o ile nie ściśniesz oka lub nie wywrzesz nadmiernego nacisku. Można również chwycić całą tkankę łączną znajdującą się bezpośrednio za gałką oczną.

Niektóre utrwalacze nie wymagają wykonania rany kłutej. Zasadniczo umieszczamy oko w probówce scyntylacyjnej o pojemności 5 cc z co najmniej 3 cc utrwalacza, aby upewnić się, że oko jest całkowicie zanurzone. W przypadku zwierząt utrwalonych metodą perfuzji niezbędna jest precyzyjna sekcja.

Używamy zakrzywionej pęsety Calibri oraz zakrzywionych nożyczek Wescotta. Chwytamy dolną powiekę za pomocą pęsety Calibri. Wprowadzamy nożyczki w kierunku kości oczodołu i rozpoczynamy wycinanie tkanki łącznej.

Wykorzystujemy krzywiznę oddaloną od gałki ocznej, unikając jej podczas dopasowywania rozmiaru. Dowolny fragment oka będzie odpowiedni na całej długości brzegu dolnej powieki, od jednego kącika do drugiego. W pewnym momencie większość tkanki łącznej zostanie usunięta, co pozwoli na wsunięcie nożyczek za gałkę oczną i jej odsuniecie.

Oto kolejny przykład: wprowadzamy nożyczki do orbity, ale przy samej kości oczodołowej, a nie przy gałce ocznej, i wycinamy tkankę łączną. Pozwoli to na stopniowe uwolnienie gałki ocznej, która przypomina piłkę do koszykówki w koszu. Używając pęsety, odsuwamy powieki i wykonujemy delikatne, krótkie cięcia wokół gałki ocznej.

W tym miejscu chwytamy tkankę łączną lub przyczep mięśnia za pomocą pęsety Collibra i kończymy oddzielanie gałki ocznej od tkanki łącznej orbity. Po odpowiednim utrwaleniu gałek ocznych, a w przypadku konieczności ich transportu, zabezpieczamy fiolkę z utrwalaczem za pomocą parafilmu.

Opakowanie musi być zgodne z przepisami Twojej uczelni oraz regulacjami rządowymi. Zazwyczaj umieszczamy je w pojemniku z dodatkiem waty, aby wchłonęła ewentualny wyciek płynu; pojemnik ten musi być szczelnie zamknięty. Tak przygotowany pojemnik transportowy zostaje następnie umieszczony w kopercie z folią bąbelkową.

Próbkę umieszcza się w laboratoryjnym opakowaniu transportowym do cieczy, wraz z całą niezbędną dokumentacją.