Poczwórna szachownica: modyfikacja trójwymiarowej szachownicy do badania kombinacji leków

Poczwórna szachownica to technika, która bada wszystkie możliwe kombinacje, które można uzyskać, łącząc cztery leki, i ważne jest, aby znaleźć leczenie dla opornych mikroorganizmów, głównie MDR lub znanych również jako mikroorganizmy wielolekooporne. Technika ta nie jest pracochłonna, a wyniki można uzyskać następnego dnia lub po zakończeniu okresu inkubacji. Oprócz tego może badać wszystkie możliwe kombinacje, a nie tylko specyficzne i bardzo ograniczone kombinacje, które można uzyskać, łącząc te cztery leki i wszystko, wszystko w jednym eksperymencie.

Oprócz tego technika ta może być stosowana w wielu dyscyplinach i to nie tylko w mikrobiologii, a nawet w mikrobiologii. Może badać wszystkie możliwe kombinacje różnych środków przeciwdrobnoustrojowych, a nie tylko środków przeciwbakteryjnych. Oprócz części mikrobiologicznej może być stosowany w celu badania kombinacji między lekami przeciwnowotworowymi, między ekstraktami roślinnymi a lekami, a nawet między panelami skutecznych molekularnych terapii molekularnych.

Miejsce przygotowania 4 96, płytki dołkowe obok siebie, aby uformować kwadrat za pomocą taśmy, sklej ich dno razem. Powtórz ten krok, aby uzyskać cztery panele, z których każdy zawiera cztery płytki i nazwij je jedynką, dwójką, trójką i czwórką. Dodaj 50 mikrolitrów Muellera.

Wskazówka i bulion do studzienek między kolumną drugą a kolumną 11 w 1696 r., płytki studzienne czterech paneli dodają 200 mikrolitrów bulionu Muellera Hintona do studzienki H 12, służąc jako kontrola ujemna. Otóż w 1696 r. płytki studzienkowe z czterech paneli dodać jeden 50-mikrolitrowy bulion Muellera Hintona do studzienek A jeden i jeden H, służący jako studzienki kontroli pozytywnej w 1696 r. płytki studzienkowe czterech paneli, lek jeden cefotaksym seryjne rozcieńczanie do stożkowej probówki o pojemności 15 ml. Sterylna woda destylowana.

Obliczyć objętość, która ma zostać usunięta z roztworu podstawowego leku, postępując zgodnie ze wzorem C, jeden V jeden równa się C, dwa, V, dwa. Pobrać obliczoną objętość z 15 ml sterylnej wody destylowanej i dodać taką samą objętość roztworu podstawowego leku Do stożkowej probówki pipetować 50 mikrolitrów przygotowanego roztworu leku do każdej studzienki w kolumnie 11 i kolumnie 12, z wyjątkiem studzienki H 12, rozpocząć seryjne rozcieńczanie, usuwając 50 mikrolitrów z kolumny 11 i umieszczając je w odpowiednich studzienkach w kolumnie 10, a następnie od 10 do osiągnięcia kolumny drugiej, gdzie 50 mikrolitrów pobranych z kolumny drugiej zostanie odrzuconych. Powtórzyć seryjne rozcieńczanie dla każdej z 1696 płytek dołkowych z czterech paneli.

Lek dwa seryjne rozcieńczenie amiki do stożkowej probówki o pojemności 10 ml. Sterylna woda destylowana. Obliczyć objętość, która ma zostać usunięta z roztworu podstawowego leku.

Usunąć obliczoną objętość z 10 ml sterylnej wody destylowanej i dodać taką samą objętość roztworu podstawowego leku do stożkowej probówki. Weź oddzielną 96-dołkową płytkę, dodaj sto mikrolitrów sterylnego bulionu Muellera Hintona do studzienek między różą G a B.In tej płytki, dodaj sto mikrolitrów wcześniej przygotowanego leku. Dwa, roztwór do studzienek rzędu G. Rozcieńczyć szeregowo Od rzędu G do rzędu B, pobierając sto mikrolitrów z każdej studzienki w RO G. I na koniec wyrzucając sto mikrolitrów z dołków rzędu B. Powtórz te kroki, aby przygotować osiem oddzielnych 96-dołkowych płytek, przenieść lek dwa do czterech paneli, pipetować 50 mikrolitrów leku dwa z dołków między rzędami G i B do Odpowiednie studzienki w każdej płytce w czterech panelach, jedna przygotowana 96-dołkowa płytka zawiera sto mikrolitrów drugiego narkotyku.

To wystarczy na dwie płytki w jednym panelu leku. Trzy żywe schaby oprócz czterech różnych stożkowych probówek o objętości 14 ml sterylnej wody destylowanej. Obliczyć objętość, która ma zostać usunięta z roztworu podstawowego leku.

Pobrać obliczoną objętość z 14 ml sterylnej wody destylowanej z każdej probówki i dodać odpowiednią objętość leku. Po przygotowaniu wymaganych stężeń trzeciego leku weź 50 mikrolitrów i dodaj go do odpowiednich studzienek między rzędami B i G oraz kolumnami drugim i 12 na odpowiedniej płytce. W każdym panelu, gdzie C, jedna odpowiada czterem P, jedna tabliczka i cztery panele, C, dwie odpowiadają czterem P, dwie płytki i cztery panele, C3 odpowiadają czterem P, trzy płytki i cztery panele, a C, cztery odpowiadają czterem P, cztery płytki i cztery panele, narkotyk: cztery trimetoprim, sulfametoksazol, dodać do stożkowej probówki, dodać 14 ml.

Dąż do wody destylowanej. Obliczyć objętość, która ma zostać usunięta z roztworu podstawowego leku. Usunąć obliczoną objętość z 14 ml sterylnej wody destylowanej z każdej probówki i dodać wymaganą objętość leku.

Po przygotowaniu wymaganych stężeń czwartego leku weź 50 mikrolitrów i dodaj go do odpowiednich studzienek między rzędami B i G oraz kolumnami drugą i 12. W czterech tabliczkach w odpowiednim panelu, gdzie C jeden odpowiada panelowi pierwszemu, C dwa odpowiada panelowi drugiemu, C3, odpowiada panelowi trzeciemu, a C cztery odpowiada panelowi czwartemu. Przygotowanie i dodanie inokulum bakteryjnego jest równe I-E-S-B-L za pomocą sterylnego transferu pętlowego.

Jedna kolonia izolatu bakteryjnego równa się uprzednio wyhodowanej na płytce na dwa ml sterylnego bulionu Muellera Hintona i wiru Sprawdź zmętnienie tam, gdzie powinno wynosić 0,5 McFarlanda za pomocą gęstości dodaj sterylny bulion Mueller Hinton TML do sterylnego kubka na mocz dodać inokulum bakteryjne z 0,5 inokulum McFarlanda do kubka na mocz według wzoru C jeden V jeden równa się C dwa V dwa, gdzie V jeden równa się 800 mikrolitrów pipeta rurowa 50 mikrolitrów roztworu inokulum i do każdej studzienki z wyjątkiem H 12, która jest kontrolą sterylności, dobrze inkubować panele w temperaturze 37 stopni Celsjusza przez noc. Ten rysunek przedstawia pierwszy panel A. Kolorowe zagłębienia to studzienki, w których występują bakterie, a czarne strzałki reprezentują dołki na wzroście.

Brak interfejsu wzrostu na płytce pierwszej, drugiej i trzeciej. Widzimy, że w rzędzie D występuje zahamowanie zawierające jeden na ponad osiem MIC amikacyny, oprócz kilku sub mików cefotaksymu i lewofloksacyny, a także jeden ponad osiem MIC trimetoprimu sulfametoksazolu na tablicy czwartej. Zauważyliśmy, że w kwadrancie zawierającym kombinację nie obserwuje się wzrostu bakterii.

Dzieje się tak, ponieważ w tej płytce mamy MIC lewofloksacyny, która całkowicie hamuje wzrost. Rysunek pierwszy B przedstawia panel drugi. W tym panelu widzimy, że hamowanie wzrostu bakterii obserwuje się również w RD, który zawiera sub iki cefotaksymu i lewofloksacyny oprócz jednego ponad ośmiu MIC amikacyny i jednego ponad czterech MIC trimetoprimu sulfametoksazolu figura 1 C reprezentuje panel A trzy.

Na tym rysunku widzimy, że zahamowanie wzrostu bakterii jest widoczne w rzędzie C i rzędzie D zawierającym kilka sub mików cefotaksymu i lewofloksacyny oraz dodatek do połowy MIC trimetoprimu sulfametoksazolu i jeden ponad cztery MIC amikacyny w rzędzie C i jeden ponad dwa MIC amikacyny w wierszu D rysunek 1D reprezentuje panel A czwarty. W tym panelu mamy jeden MIC trimetoprimu sulfametoksazolu w połączeniu z kilkoma stężeniami cefotaksymu, amikacyny i lewofloksacyny. Na tym rysunku widzimy, że wzrost bakterii jest całkowicie zahamowany w kwadrancie zawierającym kombinację, gdzie to hamowanie jest efektem jednego MIC trimetoprimu sulfametoksazolu w arkuszu FIC, wszystko w pliku Excel.

Tabela pokaże końcowy FIC dźwięku, wraz z interpretacją uzyskanej wartości. Podsumowując, technika szachownicy Q bada wszystkie możliwe kombinacje między czterema lekami w jednym eksperymencie. Wyniki są uzyskiwane następnego dnia i są interpretowane w łatwy i szybki sposób za pomocą szablonu Excel.