Transmissão de vírus de plantas Usando Whiteflies

O objetivo geral do experimento a seguir é transmitir vírus de plantas utilizando moscas-brancas. Isso é conseguido estabelecendo e mantendo uma colônia de moscas-brancas que fornece semanalmente moscas-brancas adultas recém-emergidas, não contaminadas com outros vetores ou patógenos potenciais. As colônias são mantidas adicionando-se regularmente moscas-brancas a plantas jovens livres de insetos, a partir das quais novos adultos são produzidos.

Após 17 a 20 dias, a cada semana, os adultos recém-emergidos podem ser transferidos para plantas-teste para adquirir ou transmitir o vírus. Eficiências de quase 100% são tipicamente obtidas, e as taxas de transmissão geralmente começarão baixas e aumentarão com a otimização sistemática. O aspecto mais desafiador do uso de moscas-brancas para inoculação de vírus é a criação das moscas-brancas de maneira a excluir patógenos e insetos indesejados.

Patógenos, especialmente fungos causadores de apodrecimento radicular e manchas foliares, reduzirão a qualidade das plantas hospedeiras do vírus. Insetos indesejados, como tripes, podem suprimir a reprodução de mosca-branca, além de comprometer a qualidade da planta hospedeira do vírus. As demonstrações dos procedimentos serão realizadas por Heather Capa Bianco, técnica do meu laboratório.

As colônias de mosca-branca devem ser mantidas em um ambiente de crescimento limpo e controlado. O controle da umidade relativa, temperatura, período fotoperiódico e intensidade luminosa são essenciais para uma colônia que se desenvolve do ovo ao adulto em 18 dias; utilize as seguintes configurações. A temperatura deve ser ajustada entre 26 e 30 graus Celsius, e a umidade relativa deve idealmente situar-se entre 30 e 50%. Se a umidade relativa ultrapassar 70%, é provável que patógenos fúngicos de insetos e plantas se tornem um problema.

O fotoperíodo ideal é de 14 horas. A intensidade luminosa deve ser bastante alta, e lâmpadas fluorescentes VHO podem produzir de 800 a 1000 foot candles na copa da planta. As taxas de fertilizante e a irrigação também devem ser reduzidas para inibir patógenos fúngicos, bem como o acúmulo de sais. As gaiolas para mosca-branca devem permitir ventilação, fácil acesso e espaço suficiente para uma população crescente de mosca-branca.

Obtiveram-se bons resultados com organza orgânica mais tela de alumínio, bem como tela branca. A identificação da espécie da planta é uma consideração importante. Em primeiro lugar, ela deve ter crescimento rápido, mas sem exceder o crescimento na câmara. Em segundo lugar, a planta deve ser suficientemente resistente para suportar uma alta população de insetos sem desabar.

Por essas razões, cultivares anãs ou arbustivas são boas opções de plantas. Em terceiro lugar, a planta deve ser capaz, ou não, de hospedar o vírus utilizado, dependendo do tipo de colônia que está sendo criada. Como a colônia pode colapsar devido a ácaros, THPs, moscas-brancas silvestres ou outros insetos invasores, os cultivares escolhidos devem ser cultivados em um ambiente protegido para excluir outros insetos.

As primeiras moscas-brancas de uma nova colônia devem estar livres de vírus de plantas, outros insetos e patógenos de insetos. Se as moscas-brancas forem coletadas no campo, criá-las por pelo menos oito semanas em plantas que não sejam hospedeiras do vírus durante esse período, verificando a ausência de sintomas nas plantas. Uma vez obtidas moscas-brancas livres de contaminação, introduza entre 20 e 100 indivíduos em uma gaiola com plantas por aspiração ou sacudindo-as suavemente de outra planta-fonte.

Semanalmente, é necessário montar uma nova gaiola. Nas primeiras três semanas, utilize moscas-brancas provenientes de plantas não-ST para montar a nova gaiola. A partir da quarta semana, utilize moscas-brancas adultas jovens da gaiola com três semanas de idade para montar a próxima gaiola.

Durante a primeira semana em uma gaiola, os mosquitos-brancos depositarão ovos na face inferior das superfícies foliares das plantas. Na segunda semana, as formas imaturas dos mosquitos-brancos se tornarão aparentes e alguns dos adultos ainda estarão vivos. Na terceira semana, muitos novos mosquitos-brancos adultos terão emergido, e deverá haver um aumento muito evidente na população de mosquitos-brancos adultos.

Essas moscas-brancas podem ser utilizadas em experimentos de transmissão. Na quarta semana, os adultos com uma semana de idade devem ser transferidos para uma nova gaiola. A gaiola antiga deve ser removida e suas plantas descartadas. Preciso.

A transferência suave de moscas-brancas é realizada com um dispositivo de aspiração e frascos de coleta, nunca por aspiração direta. As moscas-brancas que estão se alimentando de plantas têm seus estiletes inseridos na planta e esses se romperão se forem puxadas para longe da planta, tornando a mosca-branca inutilizável. Para coletar moscas-brancas, segure um frasco de coleta com uma das mãos e, com a outra mão, posicione um protetor plástico amarelo dentro da gaiola da colônia.

Toque suavemente nas plantas para estimular as moscas-brancas adultas a voar. As moscas-brancas serão atraídas para o cartão amarelo, onde podem ser coletadas. Usando o aspirador e uma sucção muito suave, adicione não mais de 20 moscas-brancas a cada frasco de coleta.

Em seguida, toque levemente no frasco para desorientar as moscas e tampe-o com parafina. Para garantir uma transmissão viral bem-sucedida, utilize de 15 a 40 adultos jovens provenientes de plantas infectadas pelo vírus e transfira-os para plantas saudáveis, dependendo do vírus e da planta hospedeira. Outros protocolos, como o de triagem de resistência, exigem populações iniciais maiores.

Neste caso, agite as plantas infectadas com o vírus, que estão infestadas com moscas-brancas, sobre as plantas que precisam ser inoculadas. Uma vez que as moscas-brancas são colocadas em uma planta infectada pelo vírus, permita que se alimentem por 48 a 72 horas para adquirir vírus transmitidos de forma persistente. Um tempo maior geralmente não aumenta a taxa de transmissão para vírus transmitidos de maneira não persistente ou persistentemente semiperfeita.

Um período de acesso de aquisição mais curto, de uma hora a um dia, é suficiente para experimentos que exigem aquisição de folhas específicas. Pode-se usar gaiolas de prendedor; monte a gaiola de modo que a face inferior da folha fique acessível, e não utilize mais de 10 fêmeas de mosca-branca por gaiola de 2,5 centímetros de diâmetro, pois a taxa de transmissão diminuirá devido ao excesso de indivíduos. Para a inoculação das plantas, selecione a gaiola apropriada considerando o número de plantas.

Uma planta, por exemplo, precisa apenas de uma pequena gaiola, levemente maior que ela própria; para múltiplas plantas, escolha entre uma gaiola menor com tubos de PVC, uma gaiola com estrutura de quadro ou uma gaiola maior com estrutura de alumínio. Quanto menor o espaço ao redor da copa da planta, melhor. Assim que as moscas-brancas forem adicionadas à nova planta, o tempo necessário para a inoculação depende do vírus e da planta hospedeira.

Assim como na aquisição, o tempo necessário para a transmissão depende do modo de transmissão. A transmissão não persistente exige um tempo de acesso muito menor do que a transmissão semipersistente ou persistente. Verifique se as moscas-brancas estão sondando ou se alimentando durante o período de acesso à inoculação.

Abra a gaiola e examine a superfície inferior de algumas folhas em cada planta. Para os períodos mais longos de inoculação, perturbe periodicamente as plantas suavemente para estimular a redistribuição dos organismos nas plantas.

Isso aumentará a taxa de transmissão ao contrariar a tendência natural de as moscas-brancas se agregarem ao final do período de inoculação. Elimine as moscas-brancas com dois inseticidas aplicados um após o outro. Primeiro, aplique um inseticida de contato para eliminar rapidamente as moscas-brancas adultas, como sabão inseticida.

Em segundo lugar, aplique um inseticida sistêmico para eliminar quaisquer moscas-brancas que se desenvolvam nas semanas seguintes. Qualquer adulto remanescente, árido ou piretrina, são opções eficazes. Utilizando esses procedimentos, é possível obter rotineiramente taxas de transmissão viral de 100%. Taxas tão elevadas de transmissão são essenciais ao testar plantas quanto à resistência ao vírus e são desejáveis ao avaliar a eficácia de compostos químicos quanto à sua capacidade de interferir na transmissão viral.

Após assistir a este vídeo, você deverá ter uma boa compreensão de como criar moscas-brancas e utilizá-las para transmitir vírus de plantas. Esses procedimentos podem ser usados para fins de pesquisa ou para o desenvolvimento comercial de plantas resistentes a vírus, ou ainda para testar compostos quanto à sua capacidade de interferir na transmissão do vírus.