Определение прокоагулянтной активности внеклеточных везикул (ВВ) с помощью EV-активируемого временем свертывания крови (EV-ACT)
4 августа 2023 г.
В этом протоколе исследуется использование плазмы, обогащенной внеклеточными везикулами (ВВ), в качестве индикатора коагуляционной способности ВВ. Плазма, обогащенная EV, получают в процессе дифференциального центрифугирования и последующей рекальцификации.
Основное внимание мы уделяем нарушениям свертываемости крови у пациентов, перенесших черепно-мозговую травму. В этом исследовании мы пытаемся отслеживать изменения функции свертывания крови с помощью внеклеточной везикальной активности, времени свертывания крови. Наши команды уделяют особое внимание исследованию черепно-мозговых травм.
А при черепно-мозговой травме это тяжелое состояние, которое мы называем гиперкоагулированным состоянием. Это очень сложно измерить. И мы находим в крови пациента некоторые микровезикулы, которые мы называем внеклеточными везикулами, включая тело апоптоза, микровезикулу и экзосому.
И они отличаются прокоагуляционной способностью. Поэтому мы должны найти метод измерения способности. И с помощью этого метода мы можем быстро найти разницу между внеклеточными везикулами.
Это очень важно. В зависимости от этой меры мы можем сделать многое. Мы убедились, что у мышей TPI и клинического пациента, особенно в периферическом кровообращении, это будет стоить некоторой эмболизации.
Это очень, очень серьезно с клинической точки зрения. Наш протокол имел значительное преимущество по сравнению с другими методами благодаря своей простоте, экономичности и скорости. Это позволяет проводить анализ свертываемости крови у постели больного, устраняя необходимость в обширной лабораторной обработке.
В результате наших исследований был разработан новый метод, который позволяет измерять гиперкоагулированное состояние периферической крови. Его можно использовать не только при TPI, но и при других заболеваниях, таких как сепсис, преэклампсия, опухоль и гематологические заболевания. В будущем мы планируем исследовать при сканировании клиническое гиперсостояние, которое увеличивает риск образования тромбов.
Просмотрите полный транскрипт и получите доступ к тысячам научных видео
Обзор
В данном исследовании изучаются нарушения свертываемости крови у пациентов с травмами головного мозга путем мониторинга функции коагуляции через активность внеклеточных везикул (EV). Исследование сосредоточено на состоянии гиперкоагуляции, которое трудно поддается измерению, и направлено на разработку метода оценки прокоагуляционной способности EV в образцах крови.
Основные компоненты исследования
Область науки
- Нейробиология
- Нарушения свертываемости крови
- Внеклеточные везикулы
Теоретические сведения
- Нарушения свертываемости крови часто встречаются у пациентов с травмами головного мозга.
- Внеклеточные везикулы (EV) играют роль в процессах коагуляции.
- Измерение состояния гиперкоагуляции является сложной задачей.
- Различные типы EV обладают разной прокоагулянтной активностью.
Цель исследования
- Мониторинг изменений функций свертывания крови, связанных с активностью EV.
- Разработка метода измерения коагуляционной способности EV.
- Углубление понимания процессов коагуляции при травмах головного мозга.
Используемые методы
- Сбор обогащенной EV-плазмы методом дифференциального центрифугирования.
- Рекальцификация образцов плазмы для проведения анализа.
- Оценка функции свертывания с использованием активности EV.
- Мониторинг микровезикул, включая апоптотические тельца и экзосомы.
Основные результаты
- Выявлены различия в прокоагуляционных свойствах различных внеклеточных везикул (EV).
- Разработан экспресс-метод оценки статуса коагуляции.
- Продемонстрирована значимость внеклеточных везикул для понимания нарушений свертываемости крови.
- Получены новые данные о взаимосвязи между повреждением головного мозга и коагуляцией.
Выводы
- В исследовании предлагается новый подход к измерению коагуляции у пациентов с травмами головного мозга.
- Внеклеточные везикулы являются важнейшими индикаторами коагуляционной способности.
- Необходимы дальнейшие исследования для изучения клинического значения этих результатов.
Часто задаваемые вопросы
Значимость для промышленности
Количественная оценка прокоагулянтной активности внеклеточных везикул (EV) восполняет критический пробел в раннем выявлении и оценке риска гиперкоагуляционных состояний при различных патологиях. Анализ времени свертывания, активированного EV (EV-ACT), позволяет проводить быструю прикроватную оценку коагуляции, индуцированной EV, что способствует механистическому снижению рисков и валидации мишеней в трансляционных исследованиях. Эта возможность повышает прогностическую достоверность на ключевых этапах процесса разработки и доклинических исследований.
Стратегическое применение в биофармацевтических исследованиях и разработках
Первичный поиск и валидация мишени
- Позволяет исследовать опосредованные внеклеточными везикулами (ВВ) пути коагуляции, имеющие значение для механизмов развития заболеваний.
- Способствует биологическому снижению рисков путем количественной оценки функциональной прокоагулянтной активности ВВ.
- Облегчает валидацию мишеней для вмешательств, модулирующих высвобождение или активность ВВ.
Скрининг и разработка анализа
- Обеспечивает стандартизированный количественный анализ для оценки прокоагулянтной функции EV в образцах плазмы.
- Позволяет получать воспроизводимые измерения вязкоупругости в режиме реального времени, подходящие для оптимизации анализа.
- Обеспечивает возможность быстрого скрининга образцов из различных моделей заболеваний для выявления риска гиперкоагуляции.
Трансляционные и доклинические исследования
- Соответствует моделям соответствующих заболеваний путем выявления гиперкоагуляции, вызванной внеклеточными везикулами (EV), в образцах при преэклампсии, травмах и раке.
- Обеспечивает преемственность от исследования механизмов до доклинической валидации биомаркеров коагуляции.
- Помогает в принятии решений о продвижении терапевтических кандидатов, нацеленных на пути EV, с учетом оценки рисков.
Интеграция конвейера и рабочих процессов
Метод EV-ACT интегрируется в континуум от этапа поиска до доклинических исследований, обеспечивая функциональную оценку EV как в здоровом состоянии, так и при патологиях.
- Фундаментальная биология: количественная оценка прокоагулянтной активности, опосредованной EV, для уточнения механистических гипотез.
- Скрининг: обеспечение быстрого и воспроизводимого считывания данных для оценки гиперкоагулябельности образцов.
- Аналитика: получение количественных данных о времени свертывания для сравнения различных условий и статистического анализа.
- Трансляционные исследования: перенос результатов фундаментальных открытий на доклинические модели с помощью измерений EV, имеющих значение для конкретных заболеваний.
- Корпоративное использование: предоставление масштабируемой стандартизированной платформы для постоянного изучения функций EV при различных показаниях.
Операционное и корпоративное воздействие
- Научная ценность: Повышает прогностическую достоверность механизмов коагуляции, связанных с внеклеточными везикулами (EV), и валидацию мишеней.
- Операционная ценность: Обеспечивает возможность быстрого, стандартизированного и воспроизводимого тестирования непосредственно у постели больного.
- Стратегическая ценность: Улучшает принятие решений о продолжении или прекращении разработки (go/no-go), предоставляя практически значимые данные о риске коагуляции на ранних этапах.
- Влияние на портфель: Позволяет проводить приоритизацию программ, направленных на патологии, опосредованные EV, с учетом оценки рисков.
Особенности реализации
- Требуется опыт в области биологии свертывания крови и методов выделения внеклеточных везикул (EV).
- Необходим доступ к анализаторам вязкоупругости и стандартизированным протоколам подготовки плазмы.
- Требуется согласование параметров анализа и стандартов интерпретации данных между исследовательскими группами.
- Может потребоваться адаптация для различных моделей заболеваний или типов образцов.
- Достоверность результатов зависит от качества процедур обогащения и удаления EV.
