Droplets tarafından Başlığı Hücre Kapsülleme

Benim adım Hang Moon. Kondomlar üzerine uzmanlaşmış profesörle birlikte çalışıyorum. Kendisiyle birlikte, hücrelerin 3B yapısını oluşturmak için XYJ tablası ile çalışıyoruz.

Merhaba, ben PE ve Lynn; hücre enkapsülasyonu, besiyeri ve jellerle ilgili hücre basım projesinde çalışıyorum. Bu, hücrelerin ve hücre karışımının hücre besiyerine püskürtülmesi için kullanılan solenoid valftir. Solenoid valf, iki sinyal hattı ile aktive edilir.

Sinyal hattı buradan kuru bir karttan gelmektedir. Sinyal buradan geldi. O hat üzerinden, o olan ilk fonksiyon jeneratörüdür.

İlk olarak, programlanmış yöntemimizle oluşturulur. Eğer isterseniz, hızı değiştirmek için ilgili anahtar hattı ile programı değiştirebilir veya bu süreç üreticisini bilgisayar üzerinden kontrol edebilirsiniz. Hücresel valf elektrik sinyali ile açılıp kapanır, ancak hücre bu hat üzerinden beslenir.

Hücre ve besiyeri veya agro jel, şırıngalar aracılığıyla iletilir. Suyun içindeki şırıngaların içi hava ile hafifçe basınçlandırılır. Basınçlı hava, buradaki hat gibi bir tanktan sağlanır.

Böylece ince hat ve iyonize edilmiş hava, hava filtresinden geçer. Hava filtresi tozu ve diğer kir türlerini ayırt eder. Basınç jeneratörü olarak adlandırdığımız ünite, güneş hava valfini açmak veya kapatmak için kullanılan sinyali üretir; bilgisayar ise P-I-B-U-S-V konnektörü aracılığıyla bağlanmıştır.

USB portunu doğrudan bilgisayarımızla, yani dizüstü bilgisayarla kullanabiliyoruz. O kısım buradaki tarafa bağlıdır. Ardından, buradaki kontrol dizüstü bilgisayarı aracılığıyla kontrol sağlayabiliyoruz.

Böylece, sahnenin hareketini ve çanın açılışını senkronize etmek istersek, her ikisi de bir dizüstü bilgisayar gibi aynı kontrolör üzerinden yönetilebilir. Böylece çanın ne zaman açılacağını, ne zaman kapanacağını, sahnenin ne zaman hareket edeceğini ve ne zaman duracağını kontrol edebiliriz. Hareket ile çanın açılma işlemini senkronize edebiliriz.

Bu sahne, motorlu sahnedir. Sinyal hattı ve motor aracılığıyla otomatik olarak hareket ettirilir. Motorizasyon hassasiyeti 0.1 micrometers'dır.

İdeal olarak 100 milimetreye kadar çizgi çekebilmektedir. Jet ekseni bu şekilde yukarı ve aşağı hareket eder. Böylece alt tabaka ile solar kuşak arasındaki boşluğu kontrol eder.

Böylece püskürtme yüksekliği kontrol edilebilmektedir. Bu substrat, buradaki XY sahnelerine, buradaki X ve oradaki Y eksenine bağlıdır. Dolayısıyla bir XY düzlemi üzerinde hareket etmektedir.

Böylece bazı özellik demonstrasyon aşamaları çizilir; bu aşamalar X, Y ve Z eksenleridir. Jet kon jet ekseni veya XY ekseni buradaki sinyalle kontrol edilir. Sinyal hattı buradaki hareket kontrolörüne bağlıdır. Bu hareket kontrolörünün hiçbir manuel anahtarı yoktur çünkü manuel olarak kontrol edilemez.

Dizüstü bilgisayar aracılığıyla kontrol edilmektedir. Dolayısıyla dizüstü bilgisayar bağlıdır. Kontrol cihazının arka kısmında, bir XY jet baskı hücresi için üç eksen bulunmaktadır.

Böylece bağımsız olarak üç farklı türde sinyal oluşturur. Ardından hareket kontrol cihazı, RF 2, 3, 2 konnektörleri aracılığıyla doğrudan USV'ye bağlanarak iletişim kurar. USV ise bir dizüstü bilgisayara bağlanır.

Bu şekilde dizüstü bilgisayar kontrollü bir borçlanıcıdır. AutoCAD programını kullanarak bu yolla bir G-kodu yolu oluşturuyoruz. Ardından bu, makine diline şu şekilde dönüştürülüyor.

Böylece makine dili, basit karakterler ve rakamlar şeklinde aktarılır. Burada X, Y, Z tablolarıyla ilgili her bir konum bulunmaktadır; bu tür bir program içeren dosyayı seçiyorum ve ardından programı bu şekilde indirerek açıyorum. Sonrasında, dosyadan tıpkı aynı şekilde metin dosyasını seçiyorum.

Sadece metin dosyası indirilir, metin dosyasını seçin ve dizüstü bilgisayardan com hareket kontrolörü yürütücüsüne otomatik olarak indirin; ardından daha önce belirttiğim gibi BAM karakterine geçiyor, BAM. Bu erlenmeyde NIH 3T3 fare fibroblast hücreleri bulunmaktadır. İlk olarak eski medyumun tamamını aspire edeceğim.

Bu işlem hücrelerin pasajlanması içindir ve hücreler flaskın tabanına yapışmış durumdadır. Bu nedenle medyumu aspire ettikten sonra, bir enzim olan altı µL tripsin ekleyeceğim. Tamam mı? Tripsin flaska eklendikten sonra, hücrelerin flaskın tabanından ayrılması için üç ila beş dakika beklememiz gerekir.

Şimdi besiyerini eklemeye ve hücreleri bir santrifüj tüpüne pasajlamaya hazırız. Bu, bire bir dilüsyon işlemidir. Bu nedenle, buraya 6 mL besiyeri ekliyorum ve tüm hücrelerin pasajlandığından emin olmak için hücreleri hafifçe yıkıyorum.

Ve şimdi hücreler bu tüpte santrifüj edilmeye hazır. Şimdi bu hücreleri 1000 RPM'de 3 ila 5 dakika santrifüj edeceğiz. Hücreler çökelerek bir pelet oluşturduğuna göre, süpernatanı aspire edeceğim.

Şimdi hücreleri PBS ile yıkayacağım. Bu işlem hücrelerin boyanması içindir. Kullandığımız boyalar esteraz substratlarıdır.

Tamam, şimdi hücreleri bir pelet haline getirmek için tekrar santrifüjleyeceğiz. Ardından PBS'yi aspire edeceğim ve hücreleri sayılmak üzere besiyerine yeniden askıya alacağım.

Örnek aldığımızda konsantrasyonun tüp boyunca eşit olması için hücreleri karıştırıyorum. Şimdi, hücre yoğunluğunu ölçmek için yüz mikrolitre hücre alacağım. Şimdi ise bir boya olan Trypan Blue'dan yüz mikrolitre ekliyorum.

Boyanın ölü hücre membranlarına nüfuz etmesi için üç ila beş dakika bekleyeceğiz. Hücreleri sayarken, mavi olanları saymıyoruz. Hücreler hemositometre ile sayılmaya hazır; hücre karışımının 50 µL'sini hemositometrenin her iki tarafına transfer edeceğim.

Tamam, üzerini bir lamel ile kapatacağım. Hemositometrenin iki tarafı vardır. Önce birinci tarafı sayacağım ve her iki tarafı da saydıktan sonra, trypan blue ile bire bir dilüsyon yaptığımız için ortalamayı alıp ikiyle çarpacağım.

Yani temel olarak hücre yoğunluğumuz mil başına 135 x 10⁴ hücre olacak. Deneyimiz için mil başına yarım milyon hücre konsantrasyonuna sahip bir hücre çözeltisi kullanacağız. 13,5 milyon hücremiz olduğu için, hücreleri 27 ml medyuma resüspende edeceğim.

İki farklı boya tipi kullanıyoruz. Bu, Molecular Probes firmasına ait bir canlı-ölü analizi yöntemidir. İlk boyamızın adı calcium am'dir.

İkinci boyamıza AUM homodimer adı verilmektedir. Bu boya ölü hücreleri boyar. Yeşil floresan elde etmek için mavi eksitasyon, kırmızı floresan elde etmek için ise yeşil eksitasyon kullanıyoruz. Bu iki boyama için görüntüleme yaparken, boyama solüsyonumuz PBS içerisinde hazırlanacaktır.

Öncelikle, bir tüpe 5 mL PBS (fosfat tamponlu salin) aktaracağım. Bu bir salin çözeltisidir. Şimdi, buna 0,5 µL kalsiyum am per mil ekleyeceğim.

Şimdi tüpe 2,5 µL kalsiyum am ve PBS ile seyreltilmiş mil başına iki µL athe homodimer ekliyorum. İşte btex cihazı. Bu cihaz, hücrelerin ve medyumun tüm hacme iyi dağılmasını sağlar.

Şimdi hücreye 200 µL yüklüyoruz. Ardından kapağı kapatıyoruz; bu şekilde sıkıca mühürlenmiş olur. Burada valfi açıyorum ve ardından basınçlı hava içeri giriyor, sonra vana ayarını şu şekilde yapıyorum. Böylece basınç değişiyor.

Bu nedenle ayarlama yapıyorum. Basınç 5 PSI. Boru içindeki basınç 5 PSI.

Buradan buraya, delik içerisindeki şu parça aracılığıyla bağlandı. Böylece burada kapağı açıyoruz ve ardından hücre 5 PSI basınçla enjekte edilip açılmaya başlıyor. Sonrasında ise solenoid valf çalışmaya başlıyor.

Ardından substratı yerleştiriyoruz. Substrat olarak sadece basit bir lam camı kullanıyoruz. Daha sonra uygun miktarı yüklüyoruz ve substratı sabitlemek için şu şekilde biraz bant yapıştırıyorum, tamam mı?

Ve basitçe bunu düzeltiyorum. Böylece, hücreyi, ary valfini ve substratı yerleştirip ary çalışmaya başladığında her şeyi ayarlamış oluyoruz. Dolayısıyla tüm sistemi kuruyoruz ve ardından ary valfini açarak başlatıyoruz.

Ardından sahneyi bu şekilde hareket ettiriyoruz, değil mi? Sonra altlık üzerine bir desen oluşturuyoruz ve işte karakter. Yazdırdığımız bu damlacıkları, daha önce hazırladığımız bu boya çözeltisine daldıracağım.

Şimdi damlacıklar 10 dakika boyunca inkübe edilecek ve ardından görüntüleri alınacaktır. İlk olarak, görüntüyü oküler üzerinden ayarlayacağım. İlk görüntümüz sadece bir parlak alan görüntüsüdür.

Işığı kapatacağım ve mavi eksitasyon elde etmek için filtreyi değiştireceğim; bu, yeşil floresan gösterimini sağlayacaktır. Çekeceğimiz üçüncü görüntü ise Thm Homodimer boyamasıyla belirlenen ölü hücreler olacaktır. Yeşil ışık ile kırmızı floresan elde edeceğiz.