尼罗红染色 秀丽隐杆线虫一种在固定动物中可视化脂滴的方法

- 当 可视化 脂质 液滴， 的 细胞内 储存 细胞器 用于 中性 脂质， 开始 由 添加 a 去垢剂 溶液， 如此 作为 一 含有 Triton X-100 到 的 样品 这 将 透化 的 蠕虫的 细胞 接下来， 固定 的 样本 在 的 适当的 浓度 的 异丙醇, 用于 示例 40%.

然后， 添加 尼罗河 红色 到 的 样本 和 保护 它 从 光， 因为 的 染料 是 光 敏感的。 固定 允许 的 染料 到 获取 脂质 液滴 贯穿始终 的 动物 尼罗河 红色 是 a 亲脂性 染料 其 荧光 发射 光谱 取决于 在 的 极性 的 的 局部 脂质 环境

当 暴露 到 极性 脂质， 如此 作为 磷脂 尼罗河 Red的 发射 光谱 是 在 的 更高， 红色 波长 当 暴露 至 中性 脂质， 如此 作为 三酰甘油 和 甾醇 酯 在 的 中性 核心 的 脂质 液滴， 尼罗河 雷德的 发射 光谱 移位 到 的 较低， 黄金色 波长。

因此， 使用 的 绿色 通道 的 a 荧光的 显微镜, 哪一个 将 收集 的 黄金色 波长 排放物, 到 可视化 尼罗河 红色 染色 的 脂质 液滴 贯穿始终 的 动物。 在 的 示例 方案 我们 将 参见 a 尼罗河 红色 染色 步骤 和 成像 的 脂质 液滴 在 固定的 样本。

- 至 携带 出 尼罗河 红色 脂质 染色 培养皿 线虫 开启 线虫 生长 培养基 或 NGM 接种 与 晚期 日志 OP50 大肠杆菌 和 培养 的 线虫 在 20 度 摄氏度 到 早期 L4 阶段 洗涤 的 线虫 与 1 毫升 的 PBST 溶液 和 转移 的 蠕虫 悬浮液 到一个 1.5 毫升 微型离心机 管

离心 的 线虫 在 560 次 重力 用于 一 分钟 然后 移除 的 上清液 和 重复 的 PBST 洗涤 直到 的 E. coli 是 已清除 来自 的 悬浮液 接下来， 到 的 蠕虫 沉淀物， 添加 100 微升 的 40% 异丙醇, 或 60% 用于 油红O 染色， 和 孵育 的 样本 在 室 温度 用于 三 分钟

- 在染色前 添加 异丙醇 对 线虫 的 充分 透化 处理 至关 重要 。 在 染色前。

- 以560 ×g 离心 线虫 1 分钟 ， 重力 ， 一 分钟 后 移除 上清液 ， 勿 扰动 线虫 沉淀 。

- 它 是 重要 到 最小化 光 暴露 在……期间 的 离心 步骤。

- 现在，在 避光 条件 下，向 每 个 样品 中 加入 600 µL 预 先 配制 好 的 NR 工 作 液。将 离 心 管 颠 倒 三 次，充 分 混 匀 线 虫 与 溶 液。然后，将 样品置于室温避光孵育两小时。

后续 孵育， 离心机 的 线虫 和 移除 的 上清液 然后 添加 600 微升 的 PBST 和 孵育 的 样本 在 的 暗 用于 30 分钟 到 移除 的 过量 NR 染色 之后 旋转 的 样本 再次 作为 之前， 移除 全部 但 大约 50 微升 的 上清液