为什么零假设检验对斑块定量很重要？

在斑块定量中进行零假设检验，能够客观评估实验组之间病毒载量的观察差异是否具有统计学显著性，从而支持抗病毒药物发现中的可靠靶点验证和机制风险排除。

自变量隔离如何融入噬斑测定工作流程？

在噬斑检测流程中，控制处理条件或遗传背景等变量，可确保噬斑计数的变化直接反映干预措施的效果，从而提高早期发现与筛选的预测可信度。

定量斑块计数在抗病毒研究中能够实现什么&D?

定量斑块计数可精确测量感染性病毒载量，从而能够在临床前研究中比较不同实验组之间的干预效果、剂量-反应关系以及作用机制。

为什么噬斑测定研究中的重复性要求至关重要？

噬斑测定研究中的重复实验可确保病毒载量测量的可重复性和可靠性，有助于发现研究团队与临床前团队之间的跨职能协作及数据整合。

在实施噬斑试验之前需要具备哪些统计分析能力？

解释抗病毒药物研发流程中的定量结果并支持基于数据的推进决策，需要具备如空斑形成单位计算、方差评估和显著性检验等统计分析能力。

基于噬斑实验的感染小鼠组织样本中病毒载量定量分析

JoVE Encyclopedia of Experiments

微生物学

0 次观看 • 3:40 分钟 • July 1st, 2026

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取上皮细胞单层。加入来自病毒感染的小鼠组织匀浆的稀释上清液。

孵育以进行病毒吸附，然后洗涤。

用含有琼脂的培养基覆盖细胞，形成半固体覆盖层，并进行培养。

病毒进入细胞，进行复制并裂解细胞，释放出新的病毒。

凝固的琼脂会限制病毒的扩散，形成称为噬斑的透明区域。

移除覆盖物。使用固定剂处理以灭活病毒。

加入破膜缓冲液以破坏细胞膜。

加入封闭缓冲液以防止非特异性相互作用。

加入一抗。孵育以使其与病毒核衣壳蛋白结合。

洗涤并加入与一抗结合的生物素标记的二抗。

冲洗并加入亲和素-生物素-过氧化物酶复合物，该复合物可结合至二抗上的生物素。

加入与过氧化物酶反应的显色底物，产生棕色沉淀物，使斑块着色。

在不同稀释度下计数噬斑，以定量组织样本中的病毒载量。

利用组织匀浆所得的上清液，进行10倍系列稀释，并取每种上清液稀释液各1毫升，以三复孔接种于汇合的Vero E6细胞单层。

在37°C、含5%二氧化碳的湿润培养箱中孵育1小时，使病毒吸附。完成后，用1毫升1×PBS洗涤细胞，然后在含1%琼脂的2毫升感染后培养基中，于37°C、含5%二氧化碳的湿润培养箱中继续培养细胞72小时。孵育结束后，在4°C条件下，用10%中性缓冲福尔马林处理培养板24小时以灭活病毒，确保整个培养板完全浸没。

从生物安全三级实验室取出培养板，在室温下用一毫升0.5% Triton X-100溶液洗涤细胞三次，每次10分钟。接着，用一毫升含2.5%牛血清白蛋白（BSA）的PBS溶液在37摄氏度下封闭通透化的细胞一小时，随后在37摄氏度下用一毫升含一微克每毫升SARS-CoV核衣壳蛋白交叉反应性单克隆抗体1C7C7（稀释于2.5% BSA溶液中）孵育一小时。用一毫升1×PBS溶液洗涤细胞三次，然后根据制造商说明书，使用ABC与二氨基联苯胺（DAB）过氧化物酶底物试剂盒显色斑块，最后以每毫升斑块形成单位计算病毒滴度。