利用传感器芯片通过表面等离子共振研究生物分子相互作用

为了进行表面等离子共振（SPR）以研究生物分子相互作用，首先将传感器芯片置于流动池中的 SPR 检测器上方。这种金属涂层的传感器芯片表面沉积有一层水凝胶材料，更有利于蛋白质的固定化。

将病毒肽覆盖于芯片上，使其与水凝胶相互作用并固定在表面。用碱性淬灭溶液洗涤，以防止非特异性蛋白质相互作用。

将偏振光直接照射到芯片上。在共振角时，金属中的电子会吸收该光线并发生共振，从而降低相应反射角处的反射光强度。

光电探测器收集这种反射光，处理器将该信号转换为基线，生成传感图——即表示传感器响应随时间变化的曲线图。

将抗病毒剂溶液注入流动池。在流动过程中，抗病毒剂与芯片上固定的病毒肽发生相互作用。这种结合会改变折射率，从而改变反射光的角度和强度，最终产生传感器响应。

加入高离子强度的洗涤缓冲液，以破坏两种分子之间的相互作用，导致它们解离，从而降低传感器的响应信号。

分析传感器图谱的形状，评估在生物分子相互作用中起关键作用的两个分子的结合与解离。

对于双通道SPR系统，使用HBS-EP+作为运行缓冲液，pH为1.5至1.6的10毫摩尔盐酸甘氨酸作为再生缓冲液，并开启仪器的脱气装置、自动进样器和泵。随后，用双蒸水冲洗整个系统1小时。

接下来，在检测器上滴加浸油，然后将一块镀有薄金膜且上表面用羧甲基葡聚糖水凝胶功能化的玻璃传感器芯片，直接安装到三通道流通池下方的检测器上。随后，通过向下拉动操作杆来固定装置。

为了将蛋白质配体固定到传感器芯片上，请在菜单栏中点击表单，然后在集成的SPRAutoLink软件中点击运行表编辑器以打开一个运行表。随后，从可用的运行表列表中选择并点击BASIC_固定化，并按照计算机屏幕上显示的实验步骤进行操作。

接下来，在 表单 部分点击 样本集编辑器，填写放置在自动进样器中用于后续分析的两个样品架的试剂列表。在菜单栏中选择 自动进样器采样直接控制 工具，以将样品架移出或退回原位，并将运行温度设为 4 摄氏度。

启动泵以注入双蒸水：点击工具和“泵直接控制”；记录数据：点击“SPR仪器直接控制”，每次均在新出现的窗口中开始。将偶联试剂加入300微升小瓶后，放入自动进样器样品架中，然后点击运行启动运行程序表。

在以每分钟25,000微升的流速重新启动泵后，进行30秒的基线校正。随后使用双蒸水进行1.5分钟的基线调节，再用1摩尔盐酸乙醇胺（pH 8.5）淬灭活化的芯片表面。然后，将液体进样器与脱气装置之间的管路从双蒸水切换至含有HBS-EP+的瓶子中。

单击 表单，向下滚动，通过单击此操作模式切换为“后处理”模式。然后，单击 添加，以在数据图形式中选择每个流动池随时间生成的结合曲线，并将叠加结果导出为 scrubber 文件。接下来，单击 文件 以打开文件保存选项，通过将左右曲线对齐，并从配体通道信号中减去第二个参考通道的信号，获得响应曲线。