病毒抗原微阵列检测法用于检测血清中针对病毒抗原的抗体亚型

从已制备好的病毒抗原微阵列芯片开始进行病毒抗原微阵列检测。

载玻片上包含多个垫片，每个垫片上有一个阵列，阵列中包含数百种纯化的抗原，这些抗原来自多种病毒株，并以点阵形式排列成网格。每个点位上含有一种特定类型的抗原，吸附于三维多孔硝酸纤维素表面。

将玻片固定在染色缸中，以便后续步骤操作。加入含有蛋白质的封闭缓冲液，以结合玻片上未被占据的表面位点，防止抗体非特异性结合。

将微阵列玻片与稀释的人血清共同孵育。血清中的抗体同种型会特异性识别并结合玻片上抗原的表位。

移除血清。用缓冲液洗涤以去除载玻片上未结合的抗体和蛋白质。

加入与不同量子点偶联的二抗混合物。每种混合物含有不同的量子点。特异性针对同型的二抗会特异性结合到血清中相应抗体同型，而这些抗体同型已结合在载玻片上的抗原上。

使用微阵列成像仪对微阵列芯片上的抗原-抗体结合进行定量分析。

在适当波长激发下，结合在二抗上的量子点返回基态，并发射出可被光电探测器检测到的特异性荧光信号。

斑点荧光强度可定量血清中与各抗原结合的抗体亚型。

在打印软件中设置好所需的程序后，开始打印运行。完成后，将未杂交的微阵列芯片置于室温下的干燥柜中避光盒内。

为了在微阵列上检测血清中的抗体，使用夹子将微阵列芯片有垫片的一面朝上固定在检测室上，并将检测室放入框架中。

组装载玻片时需小心，因为它们容易破碎；复水后应检查是否存在泄漏。如有必要，可拆开并重新组装载玻片以修复泄漏。

每孔加入 100 微升过滤后的封闭缓冲液以重水化切片，并在每份样品 100 微升封闭缓冲液中按 1:100 的比例稀释血清。然后，将重水化后的微阵列切片与稀释后的血清在室温下于旋转摇床以每分钟 100 至 250 转的速度孵育 30 分钟。

孵育结束后，使用连接至带有二级收集瓶的真空管线的移液枪头，从每个腔室的角落小心吸除封闭缓冲液，注意不要触碰垫片，随后立即向垫片上加入稀释后的血清，避免垫片干燥。然后，将带盖的框架放入含有湿润纸巾并密封以维持湿度的托盘中，在4摄氏度下于摇床中避光孵育过夜。

对于量子点偶联的二抗标记，需小心吸除血清（操作如前所述），然后在轨道摇床上用新鲜的T-TBS缓冲液对切片进行洗涤，每孔加入100 µL，每次5分钟，共洗涤三次。随后将切片与量子点偶联的二抗混合物孵育，之后按照上述方案中所述方法，同样洗涤三次。

最后一次洗涤后，小心地将切片从孵育槽中取出，用滤过的双蒸水轻轻冲洗切片，然后将每张切片放入一个50毫升的离心管中。随后通过离心干燥切片。

为了获取微阵列玻片的图像，首先打开便携式成像仪，然后小心地将待成像的玻片正面朝下放入成像室中的玻片架内。启动成像软件，在“配置成像仪”选项卡下，选择合适的玻片配置。

在“图像控制”选项卡下，根据血清的反应性选择合适的荧光通道，并调整曝光时间和采集时间。然后点击“捕获”以开始图像采集。采集结束后，使用以基准标记物为参照的网格来识别芯片点阵。