电刺激诱导的神经干细胞与祖细胞分化

从连接到电源的 MOE 微流控芯片开始。

该芯片包含经多聚-L-赖氨酸包被的培养区域，这些区域与进样口和出样口相连，并配有固定的氯化银/银电极用于电连接。

将微流控芯片置于加热器上，以获得最佳生长条件。

将神经干细胞和祖细胞（NPCs）流入包被的培养区域 通过 出口。

细胞通过静电作用与聚-L-赖氨酸相互作用，并黏附于微流控装置上。

接下来，加入含有生长因子的培养基，以促进已贴壁细胞的增殖。

施加电流 通过 以持续供给培养基的方式延长Ag/AgCl电极对细胞活性的影响时间。

电流刺激并激活神经前体细胞（NPCs），促进神经元突起从细胞体延伸。

此外，电刺激可触发多种细胞内信号通路。

这些通路促进神经前体细胞特异性分化为多种神经细胞，例如神经元、星形胶质细胞和少突胶质细胞。

首先，使用合适的软件绘制单个 PMMA 层和双面胶带的图案。打开二氧化碳激光刻划仪，并将其连接到个人计算机。使用软件打开设计图案文件。

将PMMA板材或双面胶带放置在激光划片机的平台上。然后，使用自动对焦工具将激光聚焦到PMMA板材或双面胶带的表面。选择激光划片机作为打印机。随后，利用激光划片机开始对PMMA板材或双面胶带进行直接烧蚀。

去除PMMA板材上的保护膜，并使用氮气清洁表面。对于多层PMMA板材的粘合，将三片1毫米厚的PMMA板材叠放，在热压机中以每平方厘米5千克的压力、110摄氏度下热压30分钟，形成流体或电刺激通道组件。使用快干型氰基丙烯酸酯胶将12个接头分别粘接到MOE芯片组件第一层的各个开口处。

在组装芯片前，使用紫外线照射对1毫米厚的PMMA基底、双面胶带以及3毫米光学级PMMA进行30分钟的消毒。用双面胶带将1毫米厚的PMMA基底粘附在3毫米光学级PMMA上，完成PMMA组件的组装。再用双面胶带将清洁后的盖玻片粘附到PMMA组件上。

用白色手拧密封塞封住琼脂桥适配器的开口。将平底连接器连接到 MOE 芯片组件上。 通过 将培养基进出口接头连接。然后，将锥形鲁尔接头连接至三通旋塞阀。使用连接在培养基进口三通旋塞阀上的3毫升注射器，加入2毫升0.01% PLL溶液，并将一支空的3毫升注射器连接至培养基出口的三通旋塞阀。

用PLL溶液填充细胞培养区域，并缓慢地来回泵送包被溶液。关闭两个三通旋塞，将溶液密封在培养区域内。将MOE芯片置于含5%二氧化碳气氛的培养箱中，在37摄氏度下孵育过夜。打开两个三通旋塞，使用两个注射器手动来回泵送包被溶液，冲洗掉通道中的气泡。

用连接至培养基入口三通阀的3毫升注射器吸取3毫升完全培养基，加入以替换细胞培养区域中的包被液。将白色手紧式堵头更换为鲁尔接头，注入3%的热琼脂糖以填充接头。将鲁尔锁注射器连接至鲁尔接头，并通过黑色橡胶塞注入3%的热琼脂糖，使鲁尔锁注射器内部充满。静置10至20分钟，使琼脂糖冷却并凝固。

将接种细胞的MOE芯片安装到固定于程序化XYZ电动载物台上的透明ITO加热器上，该加热器维持在37摄氏度。通过手动泵注将mNPCs注入MOE芯片中 通过 培养基出口。然后，将接种细胞的MOE芯片置于ITO加热器上孵育4小时。

使用电线将EF多路复用器连接到MOE芯片 通过 芯片上的电极。将EF多路复用器和函数发生器连接至放大器，以输出方波直流脉冲。