为什么零假设检验对组织透明化验证很重要？

零假设检验可确保在透明化脑组织样本中观察到的成像清晰度改善具有统计学显著性，而非由随机变异引起，从而支持可靠的靶点验证。

自变量隔离如何融入清除工作流程？

分离溶剂浓度和孵育时间等变量，可使研究团队将组织透明度的变化直接归因于特定的实验步骤，从而优化可重复性和工作流程的整合。

定量因变量测量在透明化组织成像中能够实现什么？

透明度和信号强度的定量测量能够实现对成像结果的客观比较，有助于在表型筛选和神经图谱绘制中做出基于数据的决策。

为什么复制性要求对于跨职能成像团队至关重要？

重复性可确保透明化处理方案在不同样本和操作者之间产生一致的结果，从而促进发现性研究与转化研究团队之间可靠的数据共享与合作。

在实施组织透明化方案之前需要具备哪些统计分析能力？

团队必须能够分析成像输出中的变异，并评估透明化效果的统计学显著性，以在研发流程中广泛采用前验证方案的性能。

一种用于大鼠脑组织样本的疏水性组织透明化方法

JoVE Encyclopedia of Experiments

神经科学

0 次观看 • 2:08 分钟 • April 28th, 2025

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从脑组织样本开始，由于色素和脂质的存在，该样本不透明。这些成分会导致荧光标记的神经元发生光散射。

依次将组织置于甲醇浓度逐渐升高的溶液中孵育，以去除其中的水分，逐步使组织脱水。

然后，用浓甲醇处理该组织以去除残留水分，确保完全脱水。

接下来，将组织转移至含有二氯甲烷和甲醇的初始透明化溶剂中。

在温和振荡条件下孵育，使溶剂充分渗透组织深处。

二氯甲烷可去除组织中的色素和脂质，减少光散射，从而增强组织透明度。

最后，将组织转移至二苄基醚（一种疏水性溶剂）中，不振荡孵育。

溶剂作为最终的透明剂，可进一步增强组织的透明度。

该过程可改善光线穿透，从而实现对脑组织样本中标记的神经元及其连接的更清晰观察。

将样品依次在20%、40%、60%、80%和100%甲醇中孵育，每种浓度均在室温下孵育1小时。随后，在新鲜的100%甲醇中孵育过夜。次日，在室温下将样品置于新配制的66%二氯甲烷与33%甲醇混合液中，振荡孵育3小时。3小时后，将样品置于二苄基醚中，不振荡，孵育至组织透明。然后将样品保存在二苄基醚中，直至成像。