染色体组学：利用新型OctoChrome FISH检测技术同时检测全部24条人类染色体的数目与结构异常 染色体组学, 染色体异常, FISH检测, OctoChrome, 人类染色体, 数目变异, 结构重排, 分子细胞遗传学, 染色体分析, 荧光原位杂交

Octa Chrome Fish 检测技术可在一张载玻片的单次杂交过程中同时检测全部24条人类染色体。首先，在特制的八方格载玻片上制备中期分裂相涂片。随后对样本载玻片进行自动扫描，以方便定位所有中期分裂相，并便于后续对所有细胞图像进行重新评估。

下一步，将八个方格滑动至Octa chrome装置上，并使探针杂交。根据RO装置上染色体组合的排列方式，每个方格中可显示出三种不同颜色标记的完整染色体。我最初产生这种RO FISH方法的想法，是在20世纪90年代初期开始将FISH技术应用于人类群体研究时。

随后，我在1994年美国癌症研究协会（A A CR）年会上提出了三色染色法和八方格玻片技术，用于细胞定位。该技术相较于经典的染色体弯折法和现代光谱成像法的主要优势在于，能够快速分析大量细胞中的全部24种人类染色体。首先制备悬浮固定的中期细胞，用移液管吸取适量细胞悬液滴加至玻片上作为对照，并确认细胞密度适宜。

现在将八块方形OC铬载网浸入，再放入纯乙醇中2分钟。按照交替排列的方格顺序，将5微升细胞悬液滴加到模板载玻片上，以防止细胞铺展相互干扰。在点样相邻区域之前，先将样品自然晾干。

在载玻片每半部分的中央加入 20 微升浓度为 0.2 微克/毫升的 DAPI 染色剂，并盖上盖玻片。随后，对样本载玻片进行自动扫描，以定位中期细胞。使用 metaverse 软件辅助定位所有中期细胞，并便于日后对所有细胞图像进行重新评估。

手动查看扫描结果，并删除非中期的伪影。首先，在两倍浓度的XSSC缓冲液中去除DPI染料，然后通过一系列乙醇洗涤对样本进行脱水。将载玻片晾干，随后置于37摄氏度的加热板上五分钟。

现在将染色探针、多探针杂交室和杂交缓冲液置于37摄氏度水浴中平衡，标签面朝下。将OC染色装置放在37摄氏度的加热板上。向八个区域的每一个区域加入2 µL预热的杂交溶液。

小心地翻转并调整模板的方向。将模板滑至OC铬装置上。确认模板载玻片与Octa Chrome装置对齐。

然后小心地将玻片盖在杂交溶液的液滴上，并轻轻施加均匀压力，使杂交溶液扩散至OC铬装置每个凸起区域的边缘。从玻璃玻片的磨砂端轻轻抬起并翻转，使玻片位于OC铬装置的下方。将其置于37°C的加热板上孵育10分钟。

然后将其转移至75°C的加热板上，孵育5分钟。为进行杂交步骤的样本变性，将样本转移至Chroma Probe多探针杂交室。盖上盖子，并将杂交室置于37°C水浴中过夜漂浮孵育。

小心地将玻片从仪器中取出，在 72 摄氏度下用过量 0.4 倍的 SC 溶液洗涤 2 分钟。在室温下进行第二次洗涤，持续 30 秒。随后在玻片每半部分的中央加入 20 微升 DPI，并放置盖玻片。

将样品在室温下避光孵育10分钟，然后进行荧光显微镜观察。Octa chrome鱼探针检测法可在单张载玻片上通过一次杂交实现全部24条人类染色体的同步检测。每个方格包含三种不同的全染色体涂染探针，分别用不同颜色的荧光染料直接标记。

在Octa CHRO系统的第二方格中，对一个正常中期细胞的检测显示，8号、21号和12号染色体分别被标记为红色、绿色和蓝色。可通过相应的滤光片单独观察这些染色体，或通过DAPI、Fitzy、Texas Red三色滤光片同时观察。该染色体标记方法可用于检测具有白血病特异性染色体易位和非整倍性的异常细胞。

例如，t(8;21) 是急性髓系白血病中常见的染色体易位。21 三体（即 21 号染色体的 3 个拷贝）是白血病中常见的非整倍体现象。该技术为分子细胞遗传学和分子流行病学领域的科学家探索白血病和淋巴瘤中最为常见的染色体重排，以及在临床患者或暴露于有毒化学物质的人群中检测所有人染色体的选择性倍性奠定了基础。

观看本视频后，您应充分了解如何通过八色染色体荧光原位杂交（Octo Chrome Fish）检测，在一张载玻片的单次杂交反应中同时检测全部24条人类染色体。我们将这些定义为染色体。