一种无需火焰的 C. elegans 挑虫针、刮铲和手术刀灭菌方法

本方案介绍了一种适用于秀丽隐杆线虫（C. Elegans）的无菌操作技术，该技术无需使用明火。此方法的主要优势在于通过消除明火减少了安全隐患，并且可在没有燃气管道的实验区域以及超净工作台中使用。将实验器械移入和移出灭菌区域时，若不触碰容器边缘，操作可能较为困难，但通过添加导向装置并稳定手部动作，可使操作更加简便。

首先，通过将环形支架附件导板夹在微型焚化器的外筒上，将其安装到位。根据需要，将微型焚化器插入标准的120或230伏电源插座。将微型焚化器调至高温档，预热10至20分钟，使其温度升至800至825摄氏度的最佳工作温度。

将器械沿导轨滑入圆柱形灭菌区域，注意不要触碰管壁。在灭菌区域内保持器械5至7秒。然后沿导轨向后滑动，取出器械，注意不要触碰管壁。

使用接种针时，应等待仪器冷却三到五秒后再接触线虫，以避免烫伤线虫。挑取线虫后，将接种针重新插入燃烧室中五到七秒，以焚毁针上残留的任何线虫。使用橡胶管将本生灯连接至燃气管道。

务必牢固固定导管，并将燃烧器置于远离上方物体的位置。通过旋转燃气管上的旋钮来打开燃气。使用点火器或打火机点燃燃烧器。

调节燃气旋钮和进气口，直至火焰中出现蓝色锥形。将接种针、刮刀或手术刀置于火焰中，直至其烧至发红。使用接种针时，应等待器械冷却三到五秒后再接触线虫，以免将其烫伤。

挑取线虫后，将接种针重新插入火焰中，以焚毁针上任何残留的线虫。在37摄氏度摇床中，将OP50大肠杆菌接种于LB液体培养基中过夜培养。过夜培养后，用无菌水按1:100的比例稀释菌液。

使用本生灯或微型灭菌器灭菌后的线虫挑针蘸取细菌溶液，再次灭菌后，在100 µL无菌水中旋转混匀。阳性对照组：将挑针蘸取细菌溶液后，在无菌水中混匀；阴性对照组：挑针不蘸取细菌溶液，直接灭菌后在无菌水中混匀。取100 µL水样接种于直径10 cm的LB琼脂培养皿中，用无菌涂布棒均匀涂布，并盖上皿盖，在室温下孵育24小时。

孵育结束后手动计数菌落。通过统计每份样本的菌落数量来测定相对污染率。在阴性对照平板中未发现菌落。

使用本生灯对接种环进行灭菌时，获得的平均菌落数为4.7，标准误为0.3个菌落。在微型焚烧器条件下，平均菌落数为3.3，标准误为1.2个菌落。然而，在阳性对照条件下，平均菌落数达到298.3个菌落。

因此，微型焚化器达到的无菌效果与本生灯同样有效。完成此步骤后，即可开展任何涉及挑取或分割秀丽隐杆线虫（C. Elegans）的实验方法。因此，该技术适用于多种多样的科研问题。