עשה זאת בעצמך התקן להבראת דוגמאות Cryopreserved בטעות ירד לתוך טנקים אחסון קריוגני

מטרת הליך זה היא להקל על שליפת דגימות מקופסאות קריו וממבחנות קריו מתוך מכלי duo המלאים בחנקן נוזלי, באמצעות מכשיר פשוט להכנה. הדבר מתבצע תחילה על ידי הוצאת מדף הקפאה אחד או שניים מהמכל כדי לפנות מקום לתמרון, והחדרת המכשיר באופן אנכי לתוך המכל. השלב השני הוא גירוד עדין לאורך תחתית המכל באמצעות המכשיר.

בשלב הבא, משוך את המכשיר למעלה לאורך דפנות הכלי. כדי להוציא את קופסת ההקפאה מהמיכל, השלב הסופי הוא לתפוס את הקופסה שהוצאה מהתחתית של הכלי ולהחזיר את מדפי ההקפאה שהוסרו. היתרון המרכזי של טכניקה זו על פני שיטות קיימות כגון מזיגה (decanting) או שימוש במוט מלא בחנקן נוזלי הוא שהיא מספקת חלופה פשוטה, בטוחה ומהירה, השומרת על שלמות הדגימה ויכולה להתבצע על ידי מפעיל יחיד. כדי להתחיל בהרכבת המכשיר העמיד לקריוגניה, השתמש בפלייר כדי ליישר צד אחד של אזיק חזק בעל שלושה צדדים ליצירת אזיק LHA.

כפי שניתן לראות כאן, ניתן לבחור את ממדי האזיק החזק בהתאם לקוטר צווארו של המבצע. יש להכין שני אזיקים חזקים שכאלו כדי לאפשר למכשיר לשלוף קופסאות קריו בגודל 5.5 על 5.5 אינץ'. הדק אותם באמצעות רצועת אזיק חזקה מסוג TST תוך שימוש בבורג כתר, אום, דייסה ובבורג כדי ליצור את בסיס כף הקריו.

המכשיר אמור להיראות כעת כפי שמוצג כאן. כעת, באמצעות פלטה מחוררת, יישרו את החריצים בתושבת ה-strong tie tee strap עם החריצים בקצה אחד של הפלטה המחוררת. לאחר מכן, חברו את השניים יחד באמצעות ברגים ואומים של Hillman.

קדחו חורי חיבור אם בלוח החריצים ובאזיקים החזקים אין חורים שנקדחו מראש. במידת הצורך, ניתן ליצור ידית על ידי כיפוף הקצה השני של לוח החריצים ועטיפתו בספוג. כדי להחזיק את המכשיר בצורה טובה יותר, הקפידו להסיר את הספוג לפני הניקוי במים.

ניתן להתאים את מכשיר השליפה העשיר (DIY) העמיד להקפאה גם לשליפת מבחנות הקפאה (cryo vials). פעולה זו כוללת החלפת הבסיס השטוח במסננת מפלדת אל-חלד שהותאמה לדגימת מבחנות מתוך נוזל. כדי להתחיל בהרכבה, ראשית שחררו את אומות הכתר והברגים, וחברו את רצועת הגומי החזקה לפלטה החרוצית.

לאחר מכן, לפני חיבור מסננת הנירוסטה לפלטה המחוררת, כופפו בעדינות את צוואר המסננת בעזרת פלייר כדי לכוון את הבסיס בזווית המזכירה מצקת. אם למסננת שבה משתמשים יש שפה, השתמשו בפלייר כדי לכופף את השפה כלפי מטה. פעולה זו תקל על התמרון עם המכשיר.

יישרו את החור בידית המסננת יחד עם החורים בלוח המחורר והדקו את המסננת באמצעות ברגים ואומים של Hillman. קדחו חורים אם המסננת אינה מגיעה עם חורים קדוחים מראש. כדי להתחיל בשליפת קופסאות קריו מהמכל, הקפידו להלביש תחילה כפפות קריוגניות.

לאחר מכן, הוצאו מדף מקפיא אחד או שניים מהמכל כדי לפנות מקום לתמרון עם המכשיר. בשלב הבא, השתמשו במכשיר השליפה הביתה (DIY) העמיד לקריו, המצויד בבסיס קשירה חזק, כדי לגרד בעדינות את תחתית המכל ולאסוף את הקופסה שנפלה לתחתיתו. לאחר מכן, משכו את המכשיר כלפי מעלה לאורך דפנות המכל כדי להוציא את קופסת ההקפאה מהמכל.

שימו לב שיש להחזיק את המכשיר בצורה אנכית ולמשוך אותו ישירות למעלה כדי למנוע מהקופסה להחליק חזרה אל תוך ה-doer. כדי לשלוף מבחנות קריו, השתמשו במסננת קריו (cryo scoop) המצוידת במסנן כדי לגרד בעדינות את תחתית ה-doer באופן דומה לשליפת קופסת קריו, משכו את המכשיר למעלה ואספו את המבחנות שנאספו במסנן. אתגר מרכזי במחקרי ביטוי גנים הוא שאיכות ה-RNA תלויה בתנאי האחסון הן עבור דגימות רקמה קפואות והן עבור RNA שחולץ.

איור זה מראה את השפעת הטיפול בדגימות על שלמות ה-total RNA. total RNA מאותו מקור רקמה הועבר טיפולים שונים לפני הניסוי. תכשיר total RNA שלם מראה פסי ribosomal RNA ברורים של 28 s ו-18 s, כאשר פס ה-28 s ribosomal RNA הוא בעוצמה של פי שניים בערך מפס ה-18 s ribosomal RNA. זוהי אינדיקציה לכך שה-RNA שלם. נתיבים שלושה וארבעה מציגים דגימות עם דגרדציה משמעותית עקב הפשרות חלקיות חוזרות כתוצאה מהוצאות קצרות מהמקפיא, ובכך מדמים אחסון לטווח ארוך עם דגימות תקופתיות הנובעות מהצורך בשליפת מבחנות שנפלו מהקופסאות.

עם זאת, דגימות שאוחסנו בשירות ה-doer באמצעות מכשיר ה-DIY ולכן לא עברו הפשרה חלקית, מכילות RNA שלם בנתיב שתיים. לאחר צפייה בסרטון זה, תהיה לכם הבנה טובה לגבי האופן שבו ניתן לשלוף דגימות מה-dvar הממולא בחנקן נוזלי ללא צורך בריקון שלו.