כוונון טור מקוטע זרימה מקבילה והפעלת איתור Multiplexed

המטרה הכוללת של הליך HPLC זה היא לכוונן עמודת זרימה מפולחת מקבילה כדי לאפשר זיהוי ריבוי. שיטה זו עונה על שאלות מפתח בתחומי הבריאות והרווחה, מדעי הסביבה, זיהוי פלילי וכל תחום הדורש ניתוח של דגימות מורכבות כגון גילוי ביולוגי. טכניקה זו מאפשרת ניתוח דגימה מקיף תוך מתן מידע על האופי הכימי והביו-אקטיבי של חומרים בתערובות מורכבות.

פרוטוקולי הזיהוי המרובים מאפשרים גם ניתוח מהיר. שיטה זו מאפשרת פיתוח אסטרטגיות להגדרת טביעת האצבע הכימית של תערובות מורכבות, כגון קפה ויין, ומאפשרת ליצרנים להבחין בין מוצריהם לבין זנים מזויפים זולים. בתחילה, זה עשוי להרגיש לא שגרתי לא לשלוח את כל הדגימה לגלאי אחד בלבד לניתוח מדויק.

עם זאת, ריכוז האנליטים בתוך כל זרם זרימה גבוה מזרם הזרימה הכולל של עמודה קונבנציונלית. כדי להתחיל, הגדר את מכשיר ה-HPLC עם 100% מים UE ומתנול טהור עבור שלבים ניידים A ו-B בהתאמה. אם יש להשתמש בגלאי MS, הוסף 0.1% חומצה פורמית לשני השלבים הניידים, ולאחר מכן נקה את משאבות ה-HPLC בהתאם להוראות היצרן.

הרכיבו את ה-MS UV VS. וגלאי DPPH. לפי הוראות היצרן. ודא שהרכיבים מסודרים כראוי, כך שהנפח המת בקווי הגלאי יהיה מינימלי.

לאחר מכן הגדר את אורך הגל של גלאי UV VISTA לאורך הגל הספציפי לדגימה כאן. 280 ננומטר עבור גלאי MS. השתמש במצב חיובי עבור ספירת יונים כוללת או ניתוח TIC עם שיטת זיהוי הסריקה המלאה.

איזון הטמפרטורה וזרימת הגז של גלאי MS לערכים הבאים. טמפרטורת וופורייזר של 500 מעלות צלזיוס, טמפרטורת נימים של 350 מעלות צלזיוס, זרימת גז עזר של 40 יחידות, זרימת גז סוחפת של חמש יחידות, קצב גז נדן של 60 יחידות ומתח ריסוס של 3.5 קילו-וולט. כדי להכין את המגיב הרדיקלי DPPH התחל בהמסת 25 מיליגרם של רדיקל DPPH ב-250 מיליליטר מתנול בבקבוק נפחי.

הוסף לתמיסה 250 מיקרוליטר של חומצה פורמית וסוניקציה של התמיסה למשך 10 דקות. לאחר מכן מכסים את הבקבוק ונייר הכסף כדי למנוע חשיפה לאור. לאחר מכן, נקה את המשאבה עם הפתרון הרדיקלי DPPH כפי שהמליץ היצרן כדי להגדיר את מערכת הרדיקלים DPPH.

ודא שקו המשאבה מהודק לכניסה של חתיכת T, ולאחר מכן חבר את סליל התגובה של 100 מיקרוליטר לשקע של חתיכת ה-T. חבר את הגלאי לקצה השני של מארז ה-ENC של סליל התגובה, סליל התגובה ומחמם עמודים. לבסוף הגדר את גלאי ה-UV הרדיקלי DPPH ל-520 ננומטר.

כדי לבנות את הזרימה המפולחת המקבילה או עמודת ה-PSF, חבר תחילה את כניסת העמודה למכשיר ה-HPLC. לאחר מכן, השתמש בחתיכת צינור כדי לחבר את היציאה המרכזית לגלאי MS. השתמש בצינורות באותם מידות כדי לחבר יציאת עמודה היקפית אחת לגלאי UV VS ואחרת לחתיכת ה-T של מערכת זיהוי הרדיקלים DPPH.

חסום יציאות היקפיות שאינן בשימוש באמצעות פקקי עמודים. התאם את קצב הזרימה של ה-HPLC למיליליטר אחד לדקה של 100% שלב B נייד עבור עמודה של 4.6 מילימטרים, קוטר פנימי ואורך של 250 מילימטרים. שיווי משקל למשך 20 דקות.

כדי להתחיל לכוון את מערכת ה-PSF יש לקרוע תחילה לכלי איסוף ריקים. השתמש בבקבוקונים אלה כדי לאסוף בנפרד את השלב הנייד מה-UV VS. ויציאות רדיקליות של DPPH. שימו לב לתקופת זמן האיסוף ואספו לפחות 500 מיליגרם ממס בכל כלי.

לאחר מכן, שקלו את כלי האיסוף כדי לקבוע את מסת השלב הנייד וחלקו את המסה בצפיפות המתנול כדי לחשב את נפח השלב הנייד שנאסף מכל יציאה. לבסוף, קבע את קצב הזרימה לגלאי MS וחשב את פרופורציות הזרימה של כל הגלאים כאחוז מהזרימה הכוללת כפי שמיוחס בפרוטוקול הטקסט. אם פרופורציות הזרימה חורגות באופן משמעותי מהערכים האידיאליים, הוסף צינורות נוספים במידת הצורך כדי להתאים את הלחץ האחורי ולחזור על תהליך האיסוף והחישוב.

לבסוף, הגדר את קצב הזרימה של משאבת הריאגנט הרדיקלי DPPH כך שיתאים לקצב הזרימה של יציאת היציאה המחוברת לגלאי. ניתוח HPLC מרובה בוצע על דגימת קפה. היכולת להקליט DPPH רדיקלי UV VS. ו-Ms.Chromatograms מאפשרת בו זמנית להתאים בקלות את התרכובות בדגימה שהגיבו באופן חיובי לרדיקל DPPH לתגובות UV לעומת

MS בהתבסס על יישור זמן השמירה שבו נראתה תגובה חיובית מגלאי MSS TIC, המסה המולקולרית של השיא נרשמה. הקלות בהתאמת פסגות בין תהליכי זיהוי שונים מאפשרת צורה מהירה ויעילה יותר של סינון ואפיון לדגימה מורכבת כמו קפה לאחר שליטה, ניתן להגדיר טכניקה זו תוך כשעה בלבד ולהיות מוכנה לניתוח דגימה בעקבות הליך זה. ניתן להשתמש בגלאים אחרים כגון פלואורסצנציה של מקדם שבירה, וזיהוי מבוסס כימיקלים כגון זוהר כימי על מנת לקבל מידע נוסף על הדגימה.

לאחר צפייה בסרטון זה, עליך להכיר בחשיבות של תהליכי זיהוי ריבוב להשגת הבנה טובה יותר של מדגם מורכב. יתר על כן, זיהוי מולטיפלקס באמצעות עמודות זרימה מפולחות מקבילות הוא דרך יעילה ביותר לבצע חקר ביולוגי.