Un metodo senza fiamma per sterilizzare Plettri, spatole e bisturi di C. elegans
4 marzo 2022
Questo articolo descrive un metodo per sterilizzare picconi di vermi, spatole e bisturi utilizzando un micro-inceneritore al posto di una fiamma aperta.
Questo protocollo presenta una tecnica asettica per l'uso con C.Elegans che elimina la necessità di una fiamma aperta. I principali vantaggi di questa tecnica sono che riduce i rischi per la sicurezza eliminando una fiamma aperta e può essere utilizzata in spazi di laboratorio senza linee di gas e in cappe a flusso laminare. Spostare gli strumenti dentro e fuori dall'area di sterilizzazione senza toccare i lati può essere difficile, ma l'aggiunta di una guida e la stabilizzazione della mano facilitano il movimento.
Iniziare collegando una guida accessoria per il supporto del loop al micro-inceneritore agganciandola alla canna esterna. Collegare il microinceneritore a una presa elettrica standard da 120 o 230 volt, a seconda dei casi. Ruotare il microinceneritore sull'impostazione Alta e lasciarlo riscaldare per 10-20 minuti per raggiungere una temperatura ottimale tra 800 e 825 gradi Celsius.
Inserire lo strumento nell'area di sterilizzazione cilindrica senza toccare i lati facendolo scorrere lungo la guida. Tenere lo strumento nell'area di sterilizzazione per cinque-sette secondi. Rimuovere lo strumento senza toccare i lati facendo scorrere all'indietro lungo la guida.
Per i plettri, lasciare raffreddare lo strumento per tre o cinque secondi prima di toccare un verme per evitare di bruciarlo. Dopo aver raccolto i vermi, reinserire il piccone nella camera per cinque-sette secondi per incenerire eventuali vermi sul piccone. Collegare un bruciatore Bunsen alla linea del gas utilizzando tubi di gomma.
Assicurarsi di fissare saldamente il tubo e posizionare il bruciatore lontano da oggetti aerei. Accendere il gas ruotando la manopola sulla linea del gas. Accendere il bruciatore usando un percussore o un accendino.
Regolare la fiamma utilizzando la manopola del gas e la presa d'aria fino a quando non è visibile un cono blu. Tieni il plettro, la spatola o il bisturi nella fiamma fino a quando non si illumina di rosso. Per i plettri, lasciare raffreddare lo strumento per tre o cinque secondi prima di toccare un verme per evitare di bruciarlo.
Dopo aver raccolto i vermi, reinserire il piccone nella fiamma per incenerire eventuali vermi sul piccone. Coltura di batteri OP50 E.coli in brodo di Luria durante la notte su uno shaker a 37 gradi Celsius. Dopo la coltura durante la notte, diluire la coltura in acqua sterile in un rapporto di 1:100.
Immergere un worm pick sterilizzato con un bruciatore Bunsen o un micro-inceneritore nella soluzione batterica, ri-sterilizzare e ruotarlo in 100 microlitri di acqua sterile. Per il controllo positivo, immergere il plettro in soluzione batterica, ruotare in acqua sterile e, per il controllo negativo, sterilizzare il plettro senza immergerlo in soluzione batterica e quindi ruotare nell'acqua sterile. Placcare i 100 microlitri d'acqua su una capsula di Petri di agar brodo Luria da 10 centimetri, distribuire l'acqua usando uno spandicellulare sterile e incubare a temperatura ambiente per 24 ore con il coperchio acceso.
Contare le colonie manualmente dopo il periodo di incubazione. Il tasso di contaminazione relativo è stato misurato contando il numero di colonie per campione. Nelle piastre di controllo negative sono state trovate zero colonie.
Un conteggio medio di 4,7 colonie con un errore standard di 0,3 colonie è stato ottenuto quando il bruciatore Bunsen è stato utilizzato per sterilizzare i picconi. Un conteggio medio di 3,3 colonie con un errore standard di 1,2 colonie è stato osservato nella condizione di micro-inceneritore. Tuttavia, un conteggio medio di 298,3 colonie è stato ottenuto nella condizione di controllo positivo.
Pertanto, il micro-inceneritore ha ottenuto risultati di sterilità ugualmente efficaci per il bruciatore Bunsen. Seguendo questa procedura, è possibile eseguire tutti i metodi che comportano la raccolta o la spezzettamento di C.Elegans. Pertanto, è applicabile a un'ampia varietà di domande di ricerca.
Panoramica
In questo articolo viene presentato un protocollo per la sterilizzazione degli strumenti utilizzati negli esperimenti che coinvolgono C. elegans, in particolare mediante l'uso di un micro-inceneritore al posto delle fiamme libere tradizionali. La tecnica migliora la sicurezza in laboratorio e può essere efficacemente impiegata in diverse tipologie di ambienti, inclusi quelli privi di linee del gas.
Componenti Chiave dello Studio
Area di Ricerca
- Tecniche di sterilizzazione microbica
- Protocolli di sicurezza in ambienti di laboratorio
- Applicazioni nella ricerca sui nematodi
Sfondo
- I metodi attuali presentano rischi per la sicurezza a causa delle fiamme libere
- È necessario sviluppare tecniche alternative di sterilizzazione
- Importanza della sterilizzazione nella prevenzione della contaminazione
Metodi Utilizzati
- Utilizzo di un micro-inceneritore per la sterilizzazione
- Applicazione su C. elegans
- Saggio di conteggio delle colonie per misurare la contaminazione
Risultati principali
- Il micro-inceneritore produce risultati di sterilità paragonabili a quelli dei becchi Bunsen
- La colonizzazione più bassa è stata osservata nei campioni di controllo negativo, mentre i controlli positivi hanno mostrato una contaminazione significativa
- I conteggi medi delle colonie indicano una sterilizzazione efficace con entrambi i metodi
Conclusioni
- Questo studio dimostra che il micro-incineratore è un'alternativa valida per la sterilizzazione degli strumenti nella ricerca su C. elegans.
- Migliorare la sicurezza e la sterilità nelle procedure di laboratorio è fondamentale per una ricerca biologica affidabile.
Domande frequenti
Rilevanza Industriale del Progetto
La sterilizzazione affidabile degli strumenti di laboratorio è fondamentale per mantenere l'integrità sperimentale nei flussi di lavoro di scoperta iniziale e di screening. L'adozione di un microinceneritore senza fiamma per la sterilizzazione di puntine per C. elegans, spatole e bisturi riduce i rischi operativi e amplia la compatibilità con i laboratori, sostenendo ricerche riproducibili in diversi ambienti di ricerca e sviluppo. Questo approccio consente flussi di lavoro più sicuri e standardizzati, essenziali per i processi di scoperta biotecnologica e farmaceutica su larga scala.
Applicazioni Strategiche nella Ricerca e Sviluppo in Biopharma
Scoperta Precoce e Validazione del Target
- Permette la manipolazione libera da contaminazioni di organismi modello per studi basati su ipotesi.
- Supporta la validazione funzionale degli obiettivi garantendo il trasferimento e la manipolazione asettica di campioni biologici.
- Riduce le variabili di confondimento negli studi meccanicistici minimizzando il rischio di contaminazione microbica.
Sviluppo di screening e saggi
- Facilita la preparazione di sistemi biologici validati per saggi di screening successivi.
- Migliora la riproducibilità del saggio standardizzando la sterilizzazione degli strumenti tra diversi esperimenti.
- Permette letture quantitative affidabili riducendo la variabilità del saggio causata da contaminazioni.
Ricerca Translazionale e Preclinica
- Mantiene l'integrità dei sistemi modello pertinenti alla malattia prevenendo la contaminazione incrociata.
- Garantisce la continuità dalla scoperta alla validazione preclinica assicurando una tecnica asettica costante.
- Riduce i rischi nei flussi di lavoro traslazionali fornendo controlli di sterilità robusti nella manipolazione degli organismi.
Integrazione di Pipeline e Flusso di Lavoro
Questo metodo di sterilizzazione senza fiamma si integra nelle fasi iniziali di scoperta, screening e flussi di lavoro preclinici in cui è richiesta la manipolazione asettica di organismi modello.
- Biologia della scoperta: Migliora la verifica delle ipotesi garantendo il trasferimento e la manipolazione di campioni non contaminati.
- Screening: Standardizza la preparazione degli strumenti per lo sviluppo di saggi riproducibili e scalabili.
- Analisi: Fornisce una valutazione quantitativa della contaminazione mediante il conteggio delle colonie, supportando decisioni basate sui dati.
- Ricerca traslazionale: Preserva la fedeltà del modello per studi traslazionali successivi quando supportata da saggi basati su organismi.
- Riutilizzo aziendale: Offre una capacità di sterilizzazione riutilizzabile e senza fiamma, adattabile a diverse configurazioni di laboratorio.
Impatto Operativo ed Aziendale
- Valore scientifico: Aumenta la fiducia predittiva riducendo al minimo gli artefatti legati alla contaminazione.
- Valore operativo: Migliora la sicurezza in laboratorio e consente l'utilizzo in strutture prive di infrastrutture per gas.
- Valore strategico: Favorisce flussi di lavoro scalabili e standardizzati per un avanzamento efficiente del portafoglio.
- Impatto sul portafoglio: Riduce il rischio di fallimento sperimentale dovuto alla contaminazione, sostenendo decisioni di avanzamento solide.
Considerazioni sull'Implementazione
- Richiede una formazione di base in laboratorio sulle tecniche asettiche e sulla manipolazione degli strumenti.
- Necessita dell'accesso a un microinceneritore a infrarossi e a prese elettriche compatibili.
- Richiede una standardizzazione condivisa tra i team sui tempi di sterilizzazione e sulle procedure di manipolazione.
- Adattabile a diversi sistemi modello in cui la sterilizzazione degli strumenti è fondamentale.
- La tecnica di inserimento e rimozione dello strumento deve evitare il contatto con le pareti della camera di sterilizzazione per mantenere l'efficacia.
Domande frequenti sulla biofarmaceutica
Chapters in this video
0:04
Introduction
0:34
Prepare the Micro-Incinerator
1:02
Sterilize the Pick, Spatula, or Scalpel
1:37
Comparative Method: Sterilization of Instruments Using a Bunsen Burner
2:20
Experiment
3:19
Results: Bacterial Counts Across Sterilization Methods
4:03
Conclusion
