Cryopreserved 샘플 복구를 위해 손수 함 장치 실수로 극저온 저장 탱크 떨어졌고

이 절차의 목적은 제작이 간편한 장치를 사용하여 액체 질소가 채워진 듀오 탱크에서 크라이오 박스와 크라이오 바이알 내의 샘플을 쉽게 회수하는 것입니다. 우선, 조작 공간을 확보하기 위해 듀오 탱크에서 냉동 랙 1~2개를 제거한 후 장치를 탱크 안에 수직으로 삽입하여 이를 수행합니다. 두 번째 단계는 장치를 이용해 탱크 바닥면을 따라 조심스럽게 긁어내는 것입니다.

다음으로, 장치를 도어의 벽면을 따라 수직으로 끌어올립니다. 냉동고 박스를 탱크에서 꺼내기 위한 마지막 단계는 도어 바닥에서 회수한 박스를 잡고 제거했던 냉동 랙을 다시 배치하는 것입니다. 디캔팅(decanting)이나 액체 질소 바(bar)와 같은 기존 방법과 비교했을 때 이 기술의 주요 장점은 샘플의 무결성을 보존하면서 한 명의 작업자가 수행할 수 있는 쉽고 안전하며 신속한 대안을 제공한다는 점입니다. 저온 내성 장치의 조립을 시작하려면, 플라이어를 사용하여 세 면으로 된 케이블 타이의 한쪽 면을 펴서 L자형 케이블 타이를 만듭니다.

여기서 보시는 바와 같이, 강한 결속대의 크기는 도어 넥의 직경에 따라 선택할 수 있습니다. 장치가 5.5 x 5.5인치 크라이오 박스를 회수할 수 있도록 두 개의 강한 결속대를 제작해야 합니다. 이를 크라운 볼트, 너트 와셔 및 나사를 사용하여 강한 결속 TST 스트랩으로 고정하여 크라이오 스쿱의 베이스를 형성합니다.

장치가 이제 여기 보이는 것과 같이 나타나야 합니다. 이제 슬롯 플레이트를 사용하여, 스트롱 타이 티 스트랩(strong tie tee strapp)의 슬롯을 슬롯 플레이트 한쪽 끝의 슬롯과 맞춥니다. 그런 다음 Hillman 너트와 볼트로 두 부품을 함께 고정합니다.

슬롯 플레이트와 강한 결속선에 미리 뚫린 구멍이 없는 경우, 부착을 위한 구멍을 뚫으십시오. 원하는 경우, 슬롯 플레이트의 반대쪽 끝을 구부리고 폼으로 감싸서 손잡이를 만들 수 있습니다. 장치를 더 잘 잡기 위해, 세척 전에는 반드시 폼을 제거하십시오.

동결 내성 DIY 회수 장치는 동결 보존 튜브(cryo vial) 회수용으로도 조정하여 사용할 수 있습니다. 이를 위해서는 평평한 바닥 부분을 액체에서 튜브를 퍼낼 수 있도록 개조된 스테인리스 스틸 체로 교체해야 합니다. 조립을 시작하려면 먼저 크라운 너트와 볼트를 풀고, 슬롯형 플레이트에 강력한 타이어 티 스트랩을 부착하십시오.

그 후, 스테인리스 스틸 거름망을 슬롯 플레이트에 부착하기 전에, 펜치를 사용하여 거름망의 목 부분을 조심스럽게 구부려 바닥 부분이 국자와 비슷한 각도가 되도록 조절합니다. 거름망에 립(lip)이 있는 경우, 펜치를 사용하여 립을 아래로 구부립니다. 이렇게 하면 장치를 조작하기가 더 쉬워집니다.

거름망 손잡이의 구멍을 슬롯 플레이트의 구멍과 맞춘 후, Hillman 너트와 볼트를 사용하여 거름망을 고정하십시오. 거름망에 미리 뚫린 구멍이 없는 경우 직접 구멍을 뚫으십시오. 저장 용기에서 cryo box를 꺼내기 전, 반드시 저온 장갑을 착용하십시오.

그런 다음, 장치를 조작할 공간을 확보하기 위해 냉동고에서 랙 하나 또는 두 개를 제거합니다. 다음으로, 강한 타이 끈 베이스가 장착된 수직형 저온 내성 DIY 회수 장치를 사용하여 냉동고 바닥을 따라 조심스럽게 긁어내어 냉동고 탱크 바닥에 떨어진 박스를 수집합니다. 이어서, 장치를 벽면을 따라 수직으로 끌어올려 탱크에서 냉동 박스를 퍼 올립니다.

장치를 수직으로 잡고 곧게 위로 끌어올려 박스가 다시 도어(doer) 안으로 미끄러져 들어가는 것을 방지해야 합니다. 크라이오 바이알을 회수하려면, 체가 장착된 크라이오 스쿱을 사용하여 크라이오 박스 회수 때와 비슷하게 도어 바닥을 부드럽게 긁어낸 뒤, 장치를 수직으로 들어 올려 체에 수집된 바이알을 잡으십시오. 유전자 발현 연구의 주요 과제는 냉동 조직 샘플과 추출된 RNA 모두의 저장 조건에 따라 RNA의 품질이 달라진다는 점입니다.

이 그림은 시료 처리 방식이 전체 RNA의 무결성에 미치는 영향을 보여줍니다. 동일한 조직원으로부터 얻은 전체 RNA를 실험 전 서로 다른 시료 처리 방식에 노출시켰습니다. 손상되지 않은 전체 RNA 준비물은 28 s 및 18 s 리보솜 RNA 밴드가 뚜렷하게 나타나며, 28 s 리보솜 RNA 밴드의 강도가 18 s 리보솜 RNA 밴드보다 약 2배 더 강하게 나타납니다. 이는 RNA가 온전함을 나타냅니다. 3번 및 4번 레인은 보관함에서 단기적으로 반복적으로 꺼내어 부분적으로 해동된 시료의 심각한 분해 상태를 보여주며, 이는 보관함 내 튜브의 위치 확인 등을 위해 주기적으로 꺼내어 보관하는 장기 저장 상황을 모델링한 것입니다.

하지만 DIY 장치를 사용하여 doer 서비스에 보관함으로써 부분적 해동이 일어나지 않은 샘플은 2번 레인에서 온전한 RNA를 포함하고 있습니다. 이 영상을 시청한 후에는 액체 질소로 채워진 dvar를 비울 필요 없이 샘플을 회수하는 방법에 대해 충분히 이해하게 될 것입니다.