Do-It-Yourself Устройство для восстановления криоконсервированных образцов случайно уронил в криогенных резервуаров

Целью данной процедуры является упрощение извлечения образцов из криобоксов и криопробирок из двухкамерных сосудов, заполненных жидким азотом, с помощью легко сконструированного устройства. Для этого сначала из сосуда извлекают одну или две стойки для заморозки, чтобы освободить место для маневрирования и вертикального введения устройства в сосуд. На втором этапе устройство аккуратно перемещают по дну сосуда.

Затем осторожно вытяните устройство вверх вдоль стенок контейнера. Чтобы извлечь морозильный бокс из резервуара, на последнем этапе необходимо достать бокс со дна контейнера и вернуть на место извлеченные морозильные штативы. Основным преимуществом данного метода перед существующими способами, такими как декантация или использование полостей, заполненных жидким азотом, является то, что он представляет собой простой, безопасный и быстрый вариант, который сохраняет целостность образцов и может быть выполнен одним оператором. Для начала сборки криотolerant-устройства используйте плоскогубцы, чтобы выпрямить одну сторону трехстороннего стяжного ремня, создав таким образом L-образный стяжной ремень.

Как показано здесь, размеры прочной стяжки можно выбрать в зависимости от диаметра горлышка емкости. Следует изготовить две такие стяжки, чтобы устройство могло извлекать криобоксы размером 5,5 на 5,5 дюйма. Закрепите их с помощью ремня TST, используя коронный болт, гайку, шайбу и винт, чтобы сформировать основание криочерпака.

Теперь устройство должно выглядеть так, как показано здесь. С помощью прорезанной пластины совместите прорези на Т-образном стяжном профиле с прорезями на одном конце пластины. Затем закрепите их вместе с помощью гаек и болтов Hillman.

Если в прорезанной пластине и прочных стяжках отсутствуют предварительно просверленные отверстия, просверлите отверстия для крепления. При желании можно сформировать ручку, согнув другой конец прорезанной пластины и обернув его поролоном. Чтобы устройство было удобнее держать, обязательно удалите поролон перед очисткой водой.

Криостойкое самодельное устройство для извлечения может быть также адаптировано для извлечения криопробирок. Для этого плоское основание заменяют ситом из нержавеющей стали, модифицированным для зачерпывания пробирок из жидкости. Чтобы начать сборку, сначала открутите накидные гайки и болты, прикрепив прочный ремень из автомобильной покрышки к пластине с прорезями.

Затем, перед тем как прикрепить сетку из нержавеющей стали к перфорированной пластине, осторожно согните шейку сетки с помощью плоскогубцев так, чтобы основание было расположено под углом, напоминая половник. Если используемая сетка имеет бортик, отогните его вниз с помощью плоскогубцев. Это облегчит манипуляции с устройством.

Совместите отверстие на ручке сита с отверстиями на перфорированной пластине и закрепите сито с помощью гаек и болтов Hillman. Если сито не имеет предварительно просверленных отверстий, просверлите их. Перед тем как начать извлекать криобоксы из контейнера, обязательно наденьте криогенные перчатки.

Затем извлеките одну или две стойки для заморозки из криохранилища, чтобы освободить место для маневрирования с устройством. Далее, используя вертикальное криостойкое самодельное устройство для извлечения, оснащенное прочной базой из пластиковых стяжек, аккуратно проведите по дну криохранилища, чтобы захватить контейнер, упавший на дно резервуара. Затем переместите устройство вертикально вдоль стенок криохранилища, чтобы вычерпнуть контейнер для заморозки из резервуара.

Обратите внимание, что устройство следует держать вертикально и тянуть строго вверх, чтобы коробка не соскользнула обратно в контейнер. Для извлечения криопробирок используйте криочерпак с сеткой: аккуратно проведите по дну контейнера, аналогично извлечению криокоробки, поднимите устройство вертикально и заберите пробирки, собранные в сетке. Основной проблемой в исследованиях экспрессии генов является то, что качество РНК зависит от условий хранения как замороженных образцов тканей, так и экстрагированной РНК.

На этом рисунке показано влияние условий обращения с образцами на целостность общей РНК. Общая РНК из одного и того же источника ткани подвергалась различным режимам обработки перед экспериментом. Препарат неповрежденной общей РНК демонстрирует четкие полосы 28 S и 18 S рибосомной РНК, при этом интенсивность полосы 28 S рибосомной РНК примерно в два раза выше интенсивности полосы 18 S рибосомной РНК. Это свидетельствует о целостности РНК. Дорожки три и четыре представляют образцы со значительной деградацией, вызванной повторным частичным размораживанием при кратковременном извлечении из морозильника, что моделирует длительное хранение с периодическим сливом из-за необходимости извлечения упавших пробирок из боксов.

Однако образцы, хранившиеся в сосуде Дьюара с использованием самодельного устройства и, следовательно, не подвергавшиеся частичному размораживанию, содержат интактную РНК во второй дорожке. После просмотра этого видео вы должны получить четкое представление о том, как извлекать образцы из заполненного жидким азотом сосуда Дьюара без необходимости его опорожнения.