性腺显微注射：一种将化合物直接递送至线虫 C. elegans 生殖系的方法

- 为了 准备 用于 的 注射， 使用 a 蠕虫 挑选 到 放置 a 追踪 的 卤代烃油 在 一个 琼脂糖 垫板 放置 线虫 在 的 油 和 固定 他们 由 轻柔地 推动 他们 到……上 的 琼脂 垫 确保 的 油 完全 盖子 的 动物 它 允许 氧气 到 获取 到 的 线虫 而 防止 干燥 接下来， 位置 的 琼脂糖 垫板 在 一个 注射 显微镜 和 位置 的 针 垂直的 到 的 线虫， 靶向 的 远端 结束 的 a 性腺 手臂

轻柔地 推 的 针 通过 的 角质层 和 注射 的 性腺 上肢 与 的 核酸 酸 或 化合物 的 兴趣。 每个 性腺 手臂 含有 a 生殖系 合胞体 那 将 开发 进入 个体 卵母细胞 材料 注射 进入 的 远端 性腺 将 是 整合 进入 那些 卵母细胞 和 影响 的 下一步 生成

之后 注射 线虫， 替换 的 油 与 M9 缓冲液 一旦 的 线虫 开始 移动， 转移 它们 到 一个 NGM 琼脂 培养皿 与 细菌 食物 在 的 随后 实验方案， 的 性腺 显微注射 方法 是 使用 到 递送 a Cas9 复合物 到 目标 和 编辑 的 dpy-10 基因

- 开始 与 制备 的 C. elegans 和 琼脂糖 垫片 作为 描述 在 的 text 方案 放置 一个 琼脂糖 注射 垫 和 盖子 滑动 到……上 a 解剖 显微镜 使用 a 蠕虫 挑选 到 放置 a 小 轨迹 的 卤代烃 油 沿着 一 边缘 的 的 垫板 然后， 使用 的 蠕虫 挑选 包被的 在 油 至 抬起 若干 线虫 关闭 的 NG 琼脂 培养皿 和 进入 的 追踪 的 油 随着 a 精细 毛发 已附上 至 a 移液器 如此 作为 一个 睫毛 或 猫 胡须， 位置 的 线虫 在 平行 轻柔地 推动 的 线虫 进入 的 琼脂糖 垫。 直到 舒适 与 的 显微注射 步骤， 仅 安装 和 注射 一 线虫 在 a 时间

一旦 在 位置 和 附件 到 的 垫 叠加 的 线虫 与 另一个 少数 滴 的 卤代烃 油 从 的 尖端 的 的 蠕虫 挑选。 放置 的 盖子 滑动 与 的 安装 线虫 到……上 的 注射 显微镜 下 a 低 放大倍数, 位置 的 线虫 垂直的 到 的 注射 针， 哪个 具有 已经 已填满 与 的 RNP 溶液， 作为 描述 在 的 text 方案

切换 到 a 高 放大倍数 和 重新定位 的 针 相邻的 到 的 性腺 手臂 相应的 到 的 区域 接近 的 细胞核 在 中期 到 晚期 粗线期 使用 的 显微操作仪， 移动 的 针 对抗 的 线虫， 抑郁的 的 角质层 轻微地。 然后， 与 一 手 轻敲 的 侧面 的 的 显微镜 阶段 到 休克；电击 的 针 通过 的 角质层 按压 的 注射 足部 或 按钮, 缓慢地 填充 到 性腺 上肢 与 的 注射 混合， 和 移除 的 针 重复 的 步骤 与 的 其他 性腺 手臂

一旦 的 线虫 是 注射， 移除 的 盖玻片 在 琼脂糖 垫 和 位置 它 下 a 解剖 显微镜 使用 a 拉出 毛细管 移液器， 取代 的 油 来自 的 线虫 由 移液 一个 M9 缓冲液 结束 它们。 执行 这 治疗 至 释放 的 线虫 从 的 琼脂 之后 10 分钟， 当 的 线虫 是 剧烈摆动 大约 在 的 缓冲液 移动 他们 到 一个 NG 琼脂 平板 与 OP50 细菌 使用 的 拉出 毛细管 移液器 放置 的 培养皿 在 20 度 摄氏度 用于 二 到 三 小时 直到 的 线虫 有 回收的 和 是 移动 周围。 一旦 回收的， 单独地 转移 的 线虫 到 NG 琼脂 培养皿 与 OP50 然后， 转移 的 培养皿 到 a 25 度 摄氏度 培养箱