基于微流控图案化与荧光标记的单细胞细菌生长追踪

0 次观看3:27 分钟 • October 30th, 2025

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从添加了荧光标记细菌培养物的无碳缓冲液开始。

离心以沉淀细菌,并弃去上清液。

将沉淀重悬于含有温和去污剂的新鲜无碳缓冲液中。

缺乏碳源会停止细胞生长,而洗涤剂可防止细胞聚集并保持其悬浮状态。

将细菌悬液装入注射器,并连接至泵。

将悬浮液注入含有带底部嵌入式捕获结构通道的微流控芯片入口。

缓慢从通道出口处吸出液体。

随着液体的退去,毛细作用力引导细菌向出口移动。

在此过程中,单个细菌细胞落入陷阱,从而实现细菌的图案化排列。

用预热的富含营养的肉汤持续冲洗通道。

细菌恢复生长并在陷阱内形成微菌落。

使用荧光显微镜在受控环境中捕获延时图像,并分析细菌生长情况。

用移液器将1毫升MOPS培养基加入离心管中,再加入10微升0.132摩尔的磷酸钾溶液。

取100微升过夜培养物加入离心管中,在2,300 × g条件下离心2分钟。轻柔弃去上清液,将沉淀重悬于1毫升含0.015%吐温20和0.01%磷酸钾的新鲜MOPS培养基中,并将菌液悬液装入1毫升注射器中。为确保注射器与管路连接牢固,可直接将针头插入管路。

现在将注射器安装到注射泵上,并通过通道上游入口处将悬浮液注入微流控芯片,直至悬浮液覆盖带有捕获结构的模板区域。将注射泵设置为0.07至0.2微升/分钟的流速,回抽细菌悬浮液,并通过显微镜软件监测图案形成过程。一旦细胞在模板上完成排列,即提高回抽流速,迅速排空微流控通道,并用已预先脱气至少30分钟并预热至30摄氏度的新鲜LB培养基冲洗通道。

将注射泵的流速设置为每分钟2 µL,以缓慢冲洗通道。待通道完全充满后,再次提高流速。在所需的放大倍数和时间间隔下采集正在生长的细菌图像。

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最后更新:22 八月 2026