每次都能在多组织块中精准定位正确组织

本实验的总体目标是构建一种工具，以辅助在多组织石蜡包埋块中进行组织鉴定。该目标首先通过将HistoGel与组织标记染料混合，形成颜色鲜艳的凝胶块来实现。第二步是采用标准的组织处理和包埋技术，对染色后的HistoGel凝胶块进行处理和包埋。

接下来，使用活检打孔器移除这些小圆柱体。这些小圆柱体为标本定位标签或点样。最后一步是将点样嵌入多组织块中，并准确记录点样的位置及每个样本的位置，以便于后续参考。

最终，该标记点为组织芯片和多组织块中的样本定位与鉴定提供了清晰的视觉提示。与现有的缝合标记或不对称核心等方法相比，该技术的主要优势在于标记点不会改变组织本身，并且允许样本排列具有灵活性，从而实现最佳分析效果。我们最初产生这一方法的想法，源于研究人员提出的需求：将来自多只动物的组织样本整合到同一个石蜡包埋块中，以节省成本并简化分析流程。制备标记点时，首先在15毫升锥形管中加入50毫克生化级BSA和1毫升组织标记染料。

将混合物涡旋至少一分钟，直至完全溶解。随后，将9毫升羟乙基丙烯酸酯处理凝胶加入15毫升锥形管中，并以30%的功率在微波炉中加热。以10秒为间隔分次加热，直至凝胶完全融化。

现在将融化的处理胶与染料BSA溶液合并至一个15毫升的锥形管中，并用移液器充分混匀。然后涡旋振荡溶液，转移至冰箱中静置数小时使其凝固。待完全凝固后，用窄 spatula 轻轻释放，取出凝胶中的固体扩张物。

将组织块切成5毫米厚的切片，不要使用两端的圆形部分。取3至6个切片放入组织学包埋盒中，并浸入70%乙醇中，每2至4小时更换一次70%乙醇溶液，24小时内至少更换三次，直至组织块完全脱水。

它们会将部分标记染料渗入乙醇溶液中。最初更换新鲜乙醇有助于洗去多余的染料，从而获得更干净的包埋块，减少染料渗出。接下来，将包埋盒转移至80%乙醇中，然后转移至95%乙醇中，每次各浸泡一小时。

染料可能会从凝胶塞中渗出，从而影响其他组织以及自动组织处理机中的液体试剂。因此，强烈建议采用手动脱水。然而，自动处理同样有效。

用100%乙醇进行三次洗涤，每次一小时，完成脱水。将样品浸入芳香烃或二甲苯中，每次一小时，重复三次，以透明化样品。现在用三个一小时的浸润步骤对切片进行浸透。

在融化的石蜡中，将处理好的切片按常规包埋。当包埋块冷却至室温后，使用皮肤穿刺针制作点状芯。一个包埋块可制备22个直径2毫米的芯，甚至可制备更多直径1.5毫米的芯。

首先绘制一张示意图，标明所有待共同包埋的组织块的理想位置及其身份，以及标记点的位置。准备一份副本以备随时查阅。正确使用标本定位标签需要一张清晰且易于遵循的生物标本图，该图需准确标注所有生物标本的位置及其相对于标记点的方位。

处理完组织块后，将其放置在包埋台上。根据组织定向示意图，正确的方向至关重要。同时必须确保点样核心的高度超过将要包埋在蜡块中的所有组织块。

完成组织排列后，包埋组织点。用镊子将每个组织点保持直立，直至石蜡完全凝固，以防倾倒。一到两分钟即可完成。

对于手动组织芯片（TMA）试剂盒，将熔化的石蜡注入TMA模具中。在模具冷却过程中，以类似方式在阵列边缘固定标记点。随后对带有标记点的切片进行切片和染色。

采用标准方法制备5微米厚的切片。将切片置于载玻片上时，先将其放入40摄氏度的水浴中漂浮，然后转移至带正电荷的玻璃载玻片上。切片贴附后，在60摄氏度下干燥至少20分钟。

现在可以手动或使用自动染色系统对载玻片进行染色。对于常规的苏木精和伊红（H&E）染色、特殊染色或免疫组织化学染色，染色结果在石蜡包埋块及所有石蜡切片中均呈现为圆形且颜色鲜明的区域。

点样标记有助于在包含来自不同个体和处理组的外观相似组织的多组织块中进行快速定位和组织识别。在组织中使用微阵列点样标记时，可确保每个核心都用于珍贵的组织样本，且能够轻松识别出紧邻组织微阵列核心的标记点。在执行该操作时，必须牢记对生物样本及其在组织块中对应点位的准确、清晰记录，这是其成功应用的关键。

观看本视频后，您应能够充分了解如何在多组织石蜡包埋块中轻松制作和使用标本定位标签，以辅助组织识别。