快速采集成年非洲爪蟾六种关键器官的技术

在此项工作之前，我开发了一种快速两栖类灌注的实验方案。在进行蛋白质组学和免疫组织化学等研究取样前，应采用该方案，因为在这些研究中组织内存在过量血液是不利的。尽管目前已有一些示意图和其他辅助资源，但尚无关于如何快速且可靠地解剖成年爪蟾（Xenopus）组织的全面操作指南。

我们希望标准化的采样技术能够使实验室之间更便捷地共享组织样本。这一点在由于生物安全问题或运输限制而无法进行动物进出口的情况下尤为有利。首先，取出已在安乐死溶液中浸泡一小时的青蛙，轻捏其足部以检查是否已无疼痛反应。

称量非洲爪蟾，并测量其他指标，例如从吻端到泄殖腔孔的长度。将青蛙背侧朝上放置，将其四肢固定于身体两侧。使用解剖剪沿中线剪开皮肤，然后向两侧延伸切口，形成两个皮瓣。

然后定位白线，并用镊子夹住。轻轻将其从体腔中拉出，使用剪刀剪开下方的肌肉组织。从腔壁形成两个皮瓣。

识别仍在跳动的心脏，使用解剖剪修剪环状软骨以获得更好的操作通路。接着，使用组织镊识别薄薄的心包膜并将其拉伸。用虹膜剪的尖端小心地穿破心包膜。

然后，将心包从心脏的三个腔室上剥离。在本方案中，展示了心脏心室、肝脏左叶、胰腺、脂肪体以及成对肾脏的取样方法。取样心脏心室时，用镊子夹住心室顶端，找到其与房室口和动脉干的连接处，并在这些结构下方切断。

接下来，观察肝脏的三个叶。轻轻抬起左叶，暴露肝管和胆囊管，并在导管下方取该叶的三分之一作为样本。如果蛙为雌性，找到被生殖上皮覆盖的卵巢。

轻轻将两侧叶瓣移开，以暴露附着区域。使用剪刀尽可能靠近肾脏处切除卵巢，注意避免损伤。随后，检查肝脏的中叶及其通过肠系膜和肝胰管与胃及十二指肠的连接。

使用虹膜剪，在靠近十二指肠处剪断肠系膜肝十二指肠韧带及肝胰管。将胰腺和导管从肝脏内侧叶分离，确保无深色肝组织残留。接着，用有齿镊夹住胃部。

然后，使用组织镊子夹住胰腺的上端。在5倍放大倍数下，小心地将胰腺从胃部分离。接着，定位并切除膀胱，尽可能靠近泄殖腔进行切割，随后丢弃该组织。

随后，识别大肠并将其拉伸，在靠近泄殖腔处切断。接下来，将两侧的脂肪体分离。抓住左侧脂肪体的基部，并从腹膜上将其剪下。

对于雌性青蛙或具有可见退化输卵管的雄性个体，用镊子夹住输卵管，并将其与肾脏和泄殖腔分离。在泄殖腔连接处进行剪切，并继续将输卵管从肾脏上剥离，去除所有透明的腹膜附着物。然后，用镊子夹住肾脏，在其下端剪开腹膜。

从体腔中取出肾脏。使用剪刀在不造成损伤的前提下，尽可能靠近肾脏处分离腹膜。在5倍放大倍数下，去除多余的腹膜以及残留的组织，如睾丸、脂肪体或脾脏。

释放动物后，将其置于俯卧位并固定四肢。选择一侧后肢进行取样，并固定其足部。在腓肠肌或胫腓骨区域上方切除一块杏仁状的皮瓣。

随后，用 PBS 清洗所有样品，检查是否有过多的组织，并在必要时修剪后使用。在安乐死后一小时内，完整地切取心脏心室、肝脏左叶、胰腺、左侧脂肪体、成对的肾脏以及一块皮肤。