福尔马林固定石蜡包埋（FFPE）组织保存：一种研究组织形态学的方法

— 首先，将组织切片置于用磷酸盐缓冲液（PBS）浸湿的滤纸上，以通过平衡渗透压防止细胞皱缩或肿胀。随后将组织转移至组织包埋盒中。盖紧包埋盒并将其放入中性缓冲福尔马林（NBF）溶液中。NBF 含有甲醛，可与氨基酸的氨基结合，防止产生使组织着色的甲酸。将包埋盒在低温下放置过夜，以防止核酸降解并固定组织。随后用多次酒精洗涤对组织进行脱水处理。

将其放入液态石蜡中，并压至模具底部。取下重物，将组织学包埋盒的底部置于组织上。向组装好的样本上倒入液态石蜡。将装置置于冷板上使其凝固。石蜡不溶于水，进入脱水组织后会硬化，有助于切片。将组织块转移至切片机上。在载玻片上切割并收集组织的薄切片。如果切片过厚，氧气和其他营养物质无法扩散至整个切片，从而产生假性的坏死梯度；如果切片过薄，则容易卷曲。该实验方案视频检测了肺癌福尔马林固定石蜡包埋（FFPE）组织中的生物标志物表达和细胞活力。

— 开始固定目标切片时，使用镊子小心地将其转移到一个直径10厘米、内含浸湿滤纸的培养皿中，滤纸上加入2至3毫升PBS，使切片漂浮。然后用镊子将滤纸取出，并放入组织学包埋盒（histo cassette）中。将滤纸转移至组织学包埋盒内。在组织切片上方滴加一滴稀释的苏木精溶液，以标记切片位置，便于后续操作。关闭包埋盒，将其放入4%中性缓冲甲醛溶液中，于4摄氏度下固定过夜。按照实验方案所述进行包埋盒的洗涤和处理后，打开组织学包埋盒，使用解剖刀小心地从滤纸上剥离固定好的切片。弃去滤纸，将切片转移至含有液态石蜡的模具中。

使用平整的重物将组织压紧在包埋模具底部，以确保切片均匀。将组织学包埋盒的底座部分置于模具上方，在其上加入液态石蜡，并将模具置于冷板上冷却30分钟。随后，将冷却后的模具与石蜡块分离。使用切片机对福尔马林固定石蜡包埋（FFPE）的组织切片块进行4 µm厚度的切片。修去组织周围多余的石蜡。为获得贯穿整个组织的均匀切片，调整组织块的角度，使其表面相对于刀片呈水平方向。使用细软刷子，从玻片上部开始，连续收集石蜡包埋组织的切片。继续收集组织深层至中部的切片，最后收集玻片底部区域的切片。

— 将每张组织切片不同层次的切片收集到载玻片上，旨在捕获可能由培养诱导产生的活力梯度、细胞迁移或生物标志物表达的变化。

— 收集切片后，继续按照本方案中所述的方法进行切片的处理和进一步分析。