为什么零假设检验对外泌体透射电子显微镜成像很重要？

零假设检验可确保观察到的外泌体结构并非随机伪影所致，而是真实囊泡特征的反映。这种严格的统计学方法为靶点验证提供了基础，并降低了在发现流程中推进假阳性结果的风险。

在外泌体切片和染色过程中，如何实现自变量的隔离？

分离染色时间、试剂浓度等变量，可使研究团队将成像结果明确归因于实验方案参数。这有助于提高可重复性，并为可靠的下游分析提供优化依据。

外泌体切片的定量透射电镜测量能够实现什么？

外泌体大小、形态和染色强度的定量测量为比较不同制备样品和验证检测可用性提供了客观标准。这些结果为早期发现和筛选阶段的决策提供依据。

为什么复制要求对于外泌体成像工作流程至关重要？

重复性可确保成像结果在多个样本制备过程和操作人员之间保持一致，支持跨部门协作和数据可靠性。这对于外泌体检测技术在企业范围内的推广应用至关重要。

在实施透射电子显微镜外泌体实验方案之前，需要具备哪些统计分析能力？

团队必须能够分析成像数据的变异性、可重复性和显著性，以验证方案的性能。可靠的统计分析是结构发现可信度的基础，并为流程推进决策提供支持。

包埋外泌体的切片、染色及透射电镜成像：利用透射电镜观察外泌体结构特征的实验方案

JoVE Encyclopedia of Experiments

癌症研究

0 次观看 • 2:32 分钟 • April 30th, 2023

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外泌体是由脂质双分子层包裹的纳米级球形囊泡，其腔内含有DNA、RNA和蛋白质分子。

为了利用透射电子显微镜（TEM）观察外泌体结构，首先取外泌体包埋块——即含有包埋外泌体的固体基质块。使用超薄切片机，对外泌体包埋块进行超薄切片。

将外泌体样本收集到合适的载网上，并使其附着于表面。载网可为外泌体样本在后续染色步骤中提供稳定的支撑。

接下来，将载网置于一滴醋酸铀（一种重金属染色剂）上，孵育所需时间。铀离子会与外泌体中存在的脂质、蛋白质、DNA 和 RNA 相互作用。

随后用柠檬酸铅对外泌体切片进行染色，柠檬酸铅也可与外泌体的生物分子结合。柠檬酸铅与先前结合的醋酸铀酰离子发生弱结合，从而在成像过程中增强与背景的对比度。

使用透射电子显微镜（TEM）观察双重染色的外泌体。TEM将电子束聚焦于外泌体样本上。与未染色区域相比，外泌体中的染色区域对电子的散射更强。

物镜光阑会过滤这些高度散射的电子。因此，含有染色生物分子的外泌体比背景更暗。

使用超薄切片机制备厚度为60纳米的切片。将切片置于镍网上，并用2%醋酸铀染色20分钟，随后用柠檬酸铅染色10分钟，对部分切片进行双重染色。接着，将染色后的切片放入透射电子显微镜中，以80 kV电压观察样品，并根据曝光时间的自动设置进行操作。在观察到外泌体图像后，使用显微镜的软件采集并保存图像。